發(fā)布時間：2020-04-05 06:02

【摘要】：目的檢測脊柱結(jié)核外周血微小RNA表達譜的變化,并篩選出與Toll樣受體介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路相關(guān)的、差異表達明顯的微小RNA,初步探討微小RNA對脊柱結(jié)核的調(diào)節(jié)機制。篩選出在脊柱結(jié)核與布魯氏桿菌病性脊柱炎中有一定的潛在鑒別診斷價值的微小RNA。從基因水平觀察徹底病灶清除術(shù)后小于6個月的超短程化療方案治療脊柱結(jié)核的效果。方法使用PAXgene血液RNA管收集5例健康志愿者及5例在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院脊柱骨科住院治療的脊柱結(jié)核患者的外周靜脈血,提取微小RNA,采用微小RNA芯片檢測技術(shù)進行分析,并篩選出差異倍數(shù)小于0.25的微小RNA,使用TargetscanHuman 7.1預(yù)測所選微小RNA的靶基因,再根據(jù)微小RNA的靶基因挑選出可能與Toll樣受體介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路相關(guān)的微小RNA。對篩選出差異表達明顯的微小RNA應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)在脊柱結(jié)核組和布魯氏桿菌病性脊柱炎組(各5例)靜脈血標(biāo)本中進行小樣本驗證,篩選差異表達的微小RNA;收集正常對照組60例、脊柱結(jié)核組81例及布魯氏桿菌病性脊柱炎組52例進行臨床大樣本驗證,并用受試者工作曲線分析法評估其在脊柱結(jié)核與布魯氏桿菌病性脊柱炎鑒別診斷中的潛在價值。檢測正常對照組、脊柱結(jié)核患者入院后行徹底病灶清除術(shù)治療且術(shù)后化療時間小于6個月者不同治療階段的外周血(即入院時、術(shù)后化療結(jié)束時及隨訪1年時)標(biāo)本中特定微小RNA的變化,并進行比較。結(jié)果5例正常健康志愿者及5例脊柱結(jié)核患者的外周靜脈血微小RNA表達譜對比,共有103個差異表達的微小RNA,102個微小RNA下調(diào),1個微小RNA上調(diào);差異表達倍數(shù)小于0.25且可能與Toll樣受體介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路相關(guān)的微小RNA共6個,分別為:hsa-miR-150-5p;hsa-miR-197-3p;hsa-miR-146a-5p;hsa-miR-6511a-3p;hsa-miR-342-3p;hsa-miR-4732-3p。使用TargetscanHuman 7.1預(yù)測其可能的靶基因分別為IRAK4、IRAK2、IRAK1;TLR4;MyD88;IRAK4;TRAF6;IRAK1、TRAF6。脊柱結(jié)核組與布魯氏桿菌病性脊柱炎組各選5例進行臨床小樣本驗證,結(jié)果示:hsa-miR-150-5p在脊柱結(jié)核組中表達顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其余5個微小RNA在兩組中的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義,進一步進行臨床大樣本驗證,結(jié)果示:hsa-miR-150-5p在脊柱結(jié)核組中表達下降,與布魯氏桿菌病性脊柱炎組、正常對照組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)差異,P值均小于0.05;布魯氏桿菌病性脊柱炎組與正常對照組的相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,P大于0.05。使用受試者工作曲線分析hsa-miR-150-5p在脊柱結(jié)核組與布魯氏桿菌病性脊柱炎組中的潛在的鑒別診斷價值,其曲線下面積為0.831,P0.5,約登指數(shù)為最大值0.501時,靈敏度0.538,特異度0.963。使用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測hsa-miR-150-5p在對照組及脊柱結(jié)核患者入院時、術(shù)后化療結(jié)束時、術(shù)后隨訪1年時外周靜脈血中的相對表達量,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析脊柱結(jié)核入院時hsa-miR-150-5p相對表達量與正常對照組比較表達下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);hsa-miR-150-5p在術(shù)后化療結(jié)束時、術(shù)后隨訪1年時的相對表達量與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論與正常對照組相比脊柱結(jié)核患者外周血標(biāo)本中的微小RNA表達譜發(fā)生改變,證明微小RNA在脊柱結(jié)核的發(fā)生、發(fā)展中起一定的調(diào)節(jié)作用。其中hsa-miR-150-5p、hsa-miR-197-3p、hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-6511a-3p、hsa-miR-342-3p、hsa-miR-4732-3p表達下調(diào)明顯,且可能是通過Toll樣受體介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路調(diào)節(jié)脊柱結(jié)核的發(fā)生及發(fā)展。經(jīng)臨床小樣本及大樣本驗證證實外周血中hsa-miR-150-5p對于脊柱結(jié)核與布魯氏桿菌病性脊柱炎有一定的潛在的鑒別診斷價值。脊柱結(jié)核組(入院時)較對照組外周靜脈血中hsa-miR-150-5p表達降低,術(shù)后化療結(jié)束時及隨訪1年時與正常對照組相比外周血中hsa-miR-150-5p表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義,為徹底病灶清除術(shù)的基礎(chǔ)上小于6個月的超短程化療方案的可行性研究提供了基因水平的依據(jù)。
【圖文】：

綠色表示A1組與C1組相比表達下調(diào)的基因，紅色表示A1組與C1組相比表達上調(diào)的基因

Toll樣受體介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路示意圖
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R529.2

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本文編號：2614646