【摘要】：我國(guó)是日本血吸蟲病危害最嚴(yán)重的國(guó)家�？刂萍倚蟾腥镜墨F用血吸蟲病疫苗的研發(fā)一直是研究人員努力的方向。本研究針對(duì)日本血吸蟲磷酸丙糖異構(gòu)酶這一疫苗候選分子,構(gòu)建一種新型的日本血吸蟲病疫苗——重組腺病毒疫苗,對(duì)其經(jīng)不同途徑免疫后誘導(dǎo)的宿主免疫應(yīng)答特征進(jìn)行觀察,并通過(guò)小鼠攻擊感染實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)該疫苗的免疫保護(hù)效果；進(jìn)一步,通過(guò)制備DNA疫苗、蛋白疫苗以及重組腺病毒疫苗,采用heterologous prime-boost疫苗免疫策略,觀察不同疫苗組合下免疫應(yīng)答特征的變化及免疫保護(hù)效果的差異,篩選出一種新型的、具有較高免疫保護(hù)效果的日本血吸蟲病heterologous prime-boost疫苗免疫策略；最后,對(duì)該型免疫策略進(jìn)行prime及boost次數(shù)的優(yōu)化并對(duì)其誘導(dǎo)的免疫保護(hù)作用持續(xù)時(shí)間進(jìn)行觀察。本研究結(jié)果將為日本血吸蟲病獸用傳播阻斷疫苗的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。主要研究包括： 1、日本血吸蟲重組腺病毒疫苗的構(gòu)建及免疫保護(hù)作用的研究 本部分研究中成功制備了一種新型的日本血吸蟲病疫苗——重組腺病毒疫苗(rAdV-SjTPI.opt)。該疫苗經(jīng)肌肉途徑免疫后可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生Thl型免疫應(yīng)答,減蟲率、減雌率和肝臟減卵率可分別達(dá)到54.92%、56.25%和51.62%；經(jīng)皮下免疫后可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生Th2型免疫應(yīng)答,減蟲率、減雌率及肝臟減卵率分別達(dá)到37.50%、37.50%及44.47%；而經(jīng)口服免疫后,僅可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生極低的抗體應(yīng)答,無(wú)免疫保護(hù)作用。因此認(rèn)為,rAdV-SjTPI.opt作為一種新型的日本血吸蟲病疫苗,在小鼠模型中最佳免疫途徑為肌肉免疫,可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生50%以上的免疫保護(hù)作用。 2、Heterologous prime-boost免疫策略增強(qiáng)日本血吸蟲病疫苗免疫保護(hù)作用及應(yīng)答特征的研究 本部分研究在成功制備DNA疫苗(pcDNA3.1-SjTPI.opt)、重組蛋白疫苗(rSjTPI)及重組腺病毒疫苗(rAdV-SjTPI.opt)的基礎(chǔ)上,采用pcDNA3.1-SjTPI.opt prime+rAdV-SjTPI.opt boost、rAdV-SjTPI.opt prime+rSjTPI boost及rAdV-SjTPI.opt肌肉途徑prime+皮下途徑boost等三種heterologous prime-boost免疫策略免疫小鼠,以比較不同免疫策略下誘導(dǎo)各組小鼠的免疫應(yīng)答及免疫保護(hù)作用差異。結(jié)果顯示, pcDNA3.1-SjTPI.opt prime+rAdV-SjTPI.opt boos的免疫策略誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了比單獨(dú)使用DNA疫苗更高水平的以Thl為主的免疫反應(yīng)及保護(hù)作用,減蟲率、減雌率及肝臟減卵率分別為45.13%、50.11%及54.57%；rAdV-SjTPI.opt肌肉途徑prime+皮下途徑boost的免疫策略免疫后兩種免疫途徑并未產(chǎn)生很好的協(xié)同作用,細(xì)胞因子及抗體水平均在rAdV-SjTPI.opti.m.免疫的基礎(chǔ)上有所下降,免疫保護(hù)作用也未見(jiàn)明顯提升,減蟲率、減雌率及肝臟減卵率分別為44.41%、44.51%及57.10%; rAdV-SjTPI.opt prime+rSjTPI boost的免疫策略免疫后兩種疫苗形式產(chǎn)生了較好的協(xié)同作用,誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生了更廣譜的特異性免疫應(yīng)答,免疫保護(hù)作用有了進(jìn)一步的提升,減蟲率、減雌率及肝臟減卵率可分別達(dá)到72.09%、72.73%及72.13%。因此,本部分研究中獲得了一種新型、高效的日本血吸蟲病heterologous prime-boost疫苗免疫策略,即rAdV-SjTPI.opt i.m. prime+rSjTPI s.c. boost,其可在小鼠模型中誘導(dǎo)產(chǎn)生70%以上的免疫保護(hù)作用。3、日本血吸蟲病新型疫苗免疫策略的優(yōu)化及保護(hù)效果持續(xù)時(shí)間的研究 本部分研究在制備rAdV-SjTPI.opt (V)及rSjTPI (P)的基礎(chǔ)上,首先采用不同的prime及boost次數(shù),包括V+V+V+P組、V+V+P+P組、V+V+P組、V+P+P組及V+P組,免疫小鼠,觀察誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答特征,通過(guò)攻擊感染觀察免疫保護(hù)作用,進(jìn)一步采用最優(yōu)的免疫策略免疫小鼠,并分別于免疫后2w、6w及10w檢測(cè)特異性免疫應(yīng)答水平,并進(jìn)行攻擊感染,觀察免疫后2w、6w及10w的免疫保護(hù)作用。結(jié)果顯示,V+V+V+P組誘導(dǎo)產(chǎn)生了高水平Thl型免疫應(yīng)答及IgG滴度、相對(duì)較低水平的Th2及Thl7免疫應(yīng)答,免疫保護(hù)作用最高(減蟲率、減雌率及肝臟減卵率可分別達(dá)到66.01%、69.52%及67.57%),而隨著rAdV-SjTPI.opt i.m.prime次數(shù)的減少或rSjTPI s.c. boost次數(shù)的增加,Thl細(xì)胞因子水平也相應(yīng)的下降,Th2和Th17細(xì)胞因子水平則相應(yīng)的上升,免疫保護(hù)作用相應(yīng)的下降；對(duì)免疫保護(hù)作用持續(xù)時(shí)間評(píng)估顯示,V+V+V+P策略免疫后2w-10w,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),IgG親和力、IgG滴度及Thl細(xì)胞因子呈一定下降趨勢(shì),而Th2及Th17細(xì)胞因子呈逐漸升高趨勢(shì)(IL-4除外),2w和6w減蟲率及減雌率無(wú)顯著變化,減卵率有所下降,而免疫后10w小鼠的減蟲率、減雌率及肝臟減卵率分別可達(dá)到48.83%、50.39%、53.23%。因此,rAdV-SjTPI.opt i.m. prime+rSjTPI s.c. boost的日本血吸蟲病疫苗免疫策略中,prime3次boost1次的免疫保護(hù)效果最佳,且在小鼠模型中該免疫策略免疫后10w仍可誘導(dǎo)產(chǎn)生約50%的免疫保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R532.21

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本文編號(hào)：2489282