【摘要】：背景與目的 胞穿梭素4(Exportin4, XP04)是β核轉(zhuǎn)運蛋白家族中的一員,負(fù)責(zé)多種蛋白質(zhì)和因子在胞漿和胞核之間的運輸。XP04做為一種新近確定的抑癌基因已被確定與原發(fā)性肝癌(primary liver cancer, PLC)的發(fā)病有關(guān),并有研究證實XP04的表達(dá)下降與原發(fā)性肝癌患者的預(yù)后不良相關(guān)。然而,XP04在慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染的相關(guān)疾病進(jìn)展中的表達(dá)情況尚不明確。因此,本研究的目的是探討慢性HBV感染患者外周血單個核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中XP04的mRNA表達(dá)水平和DNA啟動子甲基化狀態(tài)的臨床特點。 方法 我們選取了慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者、肝硬化(liver cirrhosis, LC)患者、原發(fā)性肝癌患者及健康對照者來作為慢性乙型肝炎病毒感染的一個橫斷面,以代表慢性乙型肝炎病毒感染的疾病進(jìn)展過程。2011年8月至2012年7月期間于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院肝病科收集CHB患者34例、LC患者38例及原發(fā)性肝癌患者44例。CHB患者及LC患者均符合美國肝臟疾病研究學(xué)會(American Association for the Study of Liver Diseases, AASLD)關(guān)于慢性乙型肝炎管理實踐指南(2009年更新版)中的診斷標(biāo)準(zhǔn),其中肝硬化患者根據(jù)Child-Pugh分級系統(tǒng),可分為A級9例,B級13例,C級16例。原發(fā)性肝癌患者符合AASLD關(guān)于肝癌管理實踐指南(2010年更新版)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。17例健康體檢者作為正常對照組。 收集以上病例及健康對照組的臨床資料：一般資料包括年齡、性別,實驗室檢查包括肝功能檢測、凝血功能檢測、乙肝五項定量／定性檢測、乙肝病毒DNA定量檢測、甲胎蛋白(α-feto protein, AFP)定量檢測,影像學(xué)檢查包括B型超聲檢查(B-ultrasound,B超)、CT(computed tomography)MRI(Magnetic Resonance Imaging)等。 手工法提取患者及正常對照者外周血單個核細(xì)胞中的總RNA及DNA。反轉(zhuǎn)錄RNA為cDNA后通過實時定量熒光PCR測定PBMCs中XPO4mRNA的水平,以反映XP04的表達(dá)情況。DNA通過重亞硫酸鹽處理后進(jìn)行甲基化修飾,應(yīng)用M3thPrimer軟件設(shè)計甲基化特異性引物,后進(jìn)行甲基化特異性PCR(methylat ion specific polymerase chainreaction, MSP),以確定患者XP04啟動了區(qū)域甲基化的情況。 結(jié)果 1.XP04的mRNA水平隨HBV感染的進(jìn)展而降低。XPO4mRNA的表達(dá)水平在四組中有明顯差異(原發(fā)性肝癌患者vs.肝硬化患者,P=0.003；原發(fā)性肝癌vs.慢性乙型肝炎患者,P=0.001；原發(fā)性肝癌患者vs.健康對照,P=0.000；肝硬化患者vs.健康對照,P=0.004；慢性乙型肝炎患者vs.健康對照,P=0.011；肝硬化患者vs.慢性乙型肝炎患者,P=0.943),且與年齡呈明顯負(fù)相關(guān)(R=-0.377,P＜0.0001)。 2.XP04啟動子區(qū)的甲基化率隨著HBV感染的進(jìn)展而升高,并與mRNA表達(dá)水平的下降有關(guān)。XP04啟動子的甲基化率在肝癌患者與CHB患者、正常對照之間有統(tǒng)計學(xué)差異(原發(fā)性肝癌患者63.6%vs.肝硬化患者47.4%,P=0.182；原發(fā)性肝癌患者63.6%vs.慢性乙型肝炎患者26.5%,P=0.01；原發(fā)性肝癌患者63.6%vs.健康對照17.6%。P=0.02),在肝硬化患者與正常對照之間也有統(tǒng)計學(xué)差異(肝硬化患者,17.4%vs.健康對照17.6%,P=0.042；肝硬化患者47.4%vs.慢性乙型肝炎患者26.5%,P=0.089；慢性乙型肝炎患者26.5%vs.健康對照17.6%,P=0.728)。相關(guān)性分析表明,在慢性HBV感染的疾病進(jìn)展過程中,DNA甲基化在抑制中XP04的轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮著作用(P=0.000)。 3.XP04啟動子區(qū)發(fā)生甲基化的肝癌患者與未發(fā)生甲基化的肝癌患者相比,前者血清AFP水平明顯升高((8702±15635)ng/ml vs.(1052±5370)ng/ml,P＜0.05)。將XP04啟動子甲基化情況的檢測與AFP檢測相結(jié)合可以提高對肝癌的檢出率和特異性。 結(jié)論 我們的結(jié)果表明,隨著慢性HBV感染疾病的進(jìn)展,外周血單個核細(xì)胞中XP04mRNA水平逐漸下降,而XP04啟動子的甲基化率逐漸增加。此外,將XP04啟動子甲基化情況的檢測與AFP檢測相結(jié)合可以提高對肝癌的檢出率和特異性,這預(yù)示著外周血單個核細(xì)胞的XP04啟動子的甲基化狀態(tài)有可能可以作為一種非侵入性的生物標(biāo)志物來預(yù)測肝癌與HBV感染的進(jìn)展。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R512.62

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本文編號：2268603