發(fā)布時間：2018-08-20 17:32

【摘要】：背景乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引發(fā)的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB),已經(jīng)成為危害全球人類健康的主要傳染病之一。目前,控制HBV誘導(dǎo)的肝臟損傷已經(jīng)成為我們的緊要任務(wù)和最終目標(biāo),而有效的抗病毒藥物是我們達(dá)到最終目標(biāo)的橋梁。替比夫定(telbivudine,L-DT)從2006年研發(fā)以來,作為一種核苷(酸)類似物(nucleos(t)ide analogs,NAs)被應(yīng)用到抗HBV治療CHB中。全球多中心研究顯示對CHB伴輕度腎功能不全的患者,在經(jīng)過L-DT抗HBV治療48周以上,腎小球?yàn)V過率(glomerular filtration rate,GFR)較基線水平顯著升高,但具體作用機(jī)制尚不明確。目的探究L-DT對大鼠腎小球系膜細(xì)胞(rat mesangial cells,RMCs)的增殖有無影響,進(jìn)一步研究L-DT對RMCs上與腎小球血流量以及濾過功能密切相關(guān)的血管緊張素Ⅱ1a受體(Angiotensin type 1a receptor,ⅡAT1aR)在表達(dá)上是上調(diào)還是下調(diào)。為進(jìn)一步研究L-DT提高患者腎小球?yàn)V過功能可能的相關(guān)分子機(jī)制,提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法體外經(jīng)消化、傳代常規(guī)培養(yǎng)后,選用處于對數(shù)生長期的RMCs進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。計(jì)數(shù)RMCs 5×104個/mL,按每孔100ul體積內(nèi)含5000個RMCs,均勻接種于3塊96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)。依據(jù)L-DT藥物濃度的不同設(shè)立空白對照組(L-DT 0mmol/L)和實(shí)驗(yàn)組(L-DT 1、10、40、60、100、150mmol/L),對RMCs分別作用24、48、72h。隨后采用4-甲基偶氮唑藍(lán)(thiazolyl tetrazolium,MTT)法檢測不同藥物濃度作用不同時間后細(xì)胞的吸光度(optical density,OD),計(jì)算出L-DT對RMCs增殖半數(shù)抑制的藥物濃度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。通過半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-PCR,RT-PCR)檢測空白對照組以及根據(jù)IC50而設(shè)立的L-DT低(10mmol/L)、中(50mmol/L)、高(100mmol/L)三個不同濃度組RMCs上AT1aRmRNA表達(dá)量的情況。將半定量RT-PCR產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳成像,選用β-actin為內(nèi)參,應(yīng)用Image-J軟件對條帶灰度值進(jìn)行測量,用AT1aR/β-actin的灰度值比值表示AT1aRmRNA相對表達(dá)量。數(shù)據(jù)錄入SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,方差的齊性檢驗(yàn)用Levene檢驗(yàn)法,組間比較使用ANOVA方差分析,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果L-DT實(shí)驗(yàn)組中的RMCs隨藥物濃度以及作用時間的增加出現(xiàn)皺縮,核縮成點(diǎn)狀,甚至有胞質(zhì)空泡。MTT法提示實(shí)驗(yàn)組中RMCs經(jīng)不同L-DT濃度(1、10、40、60、100、150mmol/L)作用24、48、72h后,通過計(jì)算增殖抑制率(Inhibition rate,IR%),發(fā)現(xiàn)L-DT組IR%均高于空白對照組(P0.05)。測得RMCs經(jīng)L-DT在濃度為100mmol/L作用48h后對細(xì)胞的IR%達(dá)到50%。半定量RT-PCR結(jié)果顯示,L-DT低(10mmol/L)、中(50mmol/L)、高(100mmol/L)三組與空白對照組相比均下調(diào)RMCs上AT1aRmRNA的表達(dá)(P0.05),且高劑量組對AT1aRmRNA表達(dá)的下調(diào)作用更顯著(P0.05)。結(jié)論1.L-DT對RMCs的增殖有抑制作用,且呈時間和濃度依賴性。2.L-DT下調(diào)了RMCs上AT1aRmRNA的表達(dá)。3.L-DT可能是通過抑制患者腎小球系膜細(xì)胞上AT1aRmRNA的表達(dá),來提高其GFR的水平。
[Abstract]:Background: chronic hepatitis B virus (chronic hepatitis) caused by hepatitis B virus (hepatitis B) infection has become one of the major infectious diseases in the world. At present, the control of HBV induced liver damage has become our urgent task and final goal, and effective antiviral drugs are the bridge to achieve our ultimate goal. Since its development in 2006, telbivudine L-DT has been used as a nucleoside analogue (nucleos (t) ide analogs in the treatment of CHB. Global multicenter study showed that the glomerular filtration rate (GFR) of CHB patients with mild renal insufficiency was significantly higher than that of baseline after 48 weeks of L-DT anti-HBV treatment, but the specific mechanism was not clear. Objective to investigate the effect of L-DT on the proliferation of rat Mesangial cells (rat mesangial cells). To further investigate whether L-DT up-regulates or down-regulates the expression of angiotensin 鈪，

本文編號：2194434