本文選題：微小RNA + 結(jié)核病��； 參考：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:目前全球性的傳染性疾病有很多種,如艾滋病、病毒性肝炎、流行性感冒、結(jié)核病等,其中結(jié)核病是常見且嚴重危害人類健康的一種慢性傳染性疾病,快速有效的早期診斷技術(shù)是結(jié)核病預(yù)防及治療的前提。本研究以結(jié)核病人和健康人血清中的微小RNA(microRNAs)為研究對象,通過實時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術(shù)檢測結(jié)核病人與健康人血清中microRNAs的表達量,找到穩(wěn)定差異表達的microRNAs分子,從而建立以microRNAs為檢測靶標的新型結(jié)核病檢測方法,以期開發(fā)出結(jié)核病的新型診斷技術(shù)。方法:本研究首先利用qRT-PCR方法檢測了50例結(jié)核病人與50例健康人血清中與結(jié)核病高度相關(guān)的六種microRNAs分子(miR-29a,miR-93*,miR-320b,miR-144*,miR-21,miR-155)的表達量情況,找到穩(wěn)定差異表達的有統(tǒng)計學(xué)意義的microRNAs分子。然后根據(jù)篩選結(jié)果,采用qRT-PCR方法對篩選出的穩(wěn)定差異表達的microRNAs分子進行樣本驗證;同時利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對樣本進行檢測,將兩種方法的檢測結(jié)果進行比較,討論microRNAs分子是否有潛力作為結(jié)核病的新型生物診斷標志物應(yīng)用于臨床,從而評估以microRNAs為靶標的新型結(jié)核病檢測方法的臨床研發(fā)價值。結(jié)果:1.結(jié)核病人與健康人血清中miR-29a的表達量存在極顯著差異;miR-320b的表達量存在顯著差異;其它4種microRNAs(miR-93*,miR-21,miR-155,miR-144*)的表達量差異不顯著。2.對miR-29a的熒光定量PCR反應(yīng)體系進行優(yōu)化,確定最佳模板濃度為5倍稀釋的反轉(zhuǎn)錄cDNA;最適引物終濃度為0.2μM,建立了以miR-29a為靶標的結(jié)核病新型檢測方法。3.以miR-29a為靶標的結(jié)核病檢測方法陽性檢測率為94%;ELISA方法的陽性檢測率為89%。結(jié)論:結(jié)核病人與健康人血清中miR-29a的表達量存在極顯著差異;建立了以miR-29a為靶標的結(jié)核病新型檢測方法;該檢測方法對結(jié)核病的檢測效果較好。
[Abstract]:Objective: at present, there are many kinds of global infectious diseases, such as AIDS, viral hepatitis, influenza, tuberculosis and so on. Rapid and effective early diagnosis is the premise of tuberculosis prevention and treatment. In this study, microRNAs in the sera of TB patients and healthy people were used to detect the expression of microRNAs in the sera of TB patients and healthy people by real-time fluorescence quantitative PCRQ RT-PCRR technique, and stable differentially expressed microRNAs molecules were found. In order to develop a new diagnosis technique of tuberculosis, a new method of tuberculosis detection based on microRNAs was established. Methods: in this study, qRT-PCR method was used to detect the expression of six microRNAs molecules (miR-29a1 miR-93), which are highly correlated with tuberculosis, in the sera of 50 TB patients and 50 healthy controls. The stable differentially expressed microRNAs molecules were found. Then, according to the screening results, the qRT-PCR method was used to verify the samples of the stable differentially expressed microRNAs molecules, and the Elisa assay was used to detect the samples, and the results of the two methods were compared. This paper discusses the potential of microRNAs molecule as a new biomarker for diagnosis of tuberculosis, so as to evaluate the value of clinical research and development of new TB detection method targeting microRNAs. The result is 1: 1. There was a significant difference in the expression of miR-29a between tuberculosis patients and healthy people, but there was no significant difference in the expression of miR-155miR-144b among the other four microRNAsmiR-93s. The fluorescence quantitative PCR reaction system of miR-29a was optimized to determine the best template concentration of 5 times dilution of reverse transcriptional cDNAand the optimal final concentration of primers was 0.2 渭 M. A new detection method of tuberculosis targeting miR-29a was established. The positive rate of TB detection method based on miR-29a was 94%. The positive rate of Elisa method was 89%. Conclusion: there is a significant difference in the expression of miR-29a between tuberculosis patients and healthy people, and a new detection method for tuberculosis, which is targeted at miR-29a, has been established, which has a good effect on the detection of tuberculosis.
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R52;R440

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本文編號：1899776