本文選題：微環(huán)載體　切入點：shRNA　出處：《解放軍醫(yī)學雜志》2017年11期

【摘要】：目的探討微環(huán)DNA載體介導的shRNA對HBV轉基因小鼠體內乙肝病毒復制及表達的抑制效應。方法采用分子克隆技術制備靶向HBV基因的shRNA通用質粒p U6-shRNA HBV和微環(huán)shRNA質粒p MC-U6-shRNA HBV。將HBV轉基因小鼠隨機分為微環(huán)shRNA組、通用質粒shRNA組和無關質粒對照組,利用水動力轉染技術分別導入p MCU6-shRNA HBV、p U6-shRNA HBV及對照載體p U6-control。于轉染后第1、7、14、21、28、35天,分別采用Real-time PCR及化學發(fā)光微粒子免疫分析法(CMIA)檢測轉基因小鼠血清HBV DNA及HBs Ag水平,免疫組化染色觀察轉基因小鼠肝臟HBc Ag的表達。結果質粒注射后第7~21天,p U6-shRNA HBV及p MC-U6-shRNA HBV對轉基因小鼠血清HBs Ag的表達及HBV DNA的復制均有明顯抑制作用,與p U6-control相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);21d后p U6-shRNA HBV組血清HBs Ag及HBV DNA均有所回升,至第35天基本回復至對照水平;至注射后35d,p MC-U6-shRNA HBV依然保持較強的體內抑制作用,與其他兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫組化結果顯示,與p U6-shRNA HBV組相比,p MC-U6-shRNA HBV組小鼠肝組織內HBc Ag陽性細胞數(shù)明顯減少。結論與p U6-shRNA HBV質粒相比,微環(huán)shRNA質粒p MC-U6-shRNA HBV對HBV轉基因小鼠體內乙肝病毒的抑制作用持續(xù)時間更長久。采用微環(huán)DNA作為shRNA的體內遞送載體與普通的質粒載體相比具有一定優(yōu)勢。
[Abstract]:Objective to investigate the inhibitory effect of microloop DNA vector mediated shRNA on HBV replication and expression in HBV transgenic mice.Methods the shRNA general plasmid p U6-shRNA HBV targeting HBV gene and the microloop shRNA plasmid p MC-U6-shRNA HBV were prepared by molecular cloning technique.HBV transgenic mice were randomly divided into three groups: microloop shRNA group, general plasmid shRNA group and unrelated plasmid control group. Hydrodynamic transfection technique was used to introduce p MCU6-shRNA HBV HBV and control vector pU6-control. respectively.Real-time PCR and chemiluminescence microparticle immunoassay were used to detect the levels of HBV DNA and HBs Ag in serum of transgenic mice. The expression of HBc Ag in liver of transgenic mice was observed by immunohistochemical staining.Results the expression of HBs Ag in serum and the replication of HBV DNA in transgenic mice were significantly inhibited by p#en10# HBV and p MC-U6-shRNA HBV on the 7th day after injection. The serum HBs Ag and HBV DNA in p U6-shRNA HBV group increased significantly after 21 days compared with p U6-control.At the 35th day, the control level was basically restored to the control level, and the inhibitory effect of MC-U6-shRNA HBV was still strong at 35d after injection, which was significantly different from that of the other two groups (P 0.05).The results of immunohistochemistry showed that compared with p U6-shRNA HBV group, the number of HBc Ag positive cells in liver tissue of mice in p U6-shRNA HBV group was significantly lower than that in p U6-shRNA HBV group.Conclusion compared with p U6-shRNA HBV plasmid, the inhibitory effect of microloop shRNA plasmid p MC-U6-shRNA HBV on hepatitis B virus in HBV transgenic mice is longer than that of p U6-shRNA HBV plasmid.Using microloop DNA as the delivery vector of shRNA in vivo has some advantages compared with the ordinary plasmid vector.
【作者單位】： 解放軍第458醫(yī)院全軍肝病中心、全軍轉基因動物重點實驗室;
【基金】：廣東省科技計劃項目(2014A020212639) 廣州市科技計劃項目(201510010004,201604046020)~~
【分類號】：R512.62

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本文編號：1690813