本文選題：狂犬病　切入點(diǎn)：狂犬病病毒屬病毒　出處：《中國(guó)疾病預(yù)防控制中心》2016年博士論文

【摘要】：狂犬病(Rabies),是一種由狂犬病病毒屬病毒(Lyssavirus, LYSSA)感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)而引起的高度致死性腦脊髓炎,是最早被人類所發(fā)現(xiàn)和認(rèn)識(shí)的疾病之一�？袢∫越�100%的病死率成為全世界感染死亡率最高的疾病,在臨床上主要表現(xiàn)為狂躁型和麻痹型兩種。不同基因型別狂犬病病毒的致病性有所不同,在犬、貓等哺乳動(dòng)物中主要傳播和流行的狂犬病病毒通常為基因Ⅰ型的狂犬病病毒(Rabies virus, RABV), I臨床表現(xiàn)以狂躁型為主；而在蝙蝠中傳播的狂犬病病毒基因型別較多也較為復(fù)雜,但毒力相對(duì)較弱,一般出現(xiàn)麻痹型臨床表現(xiàn)。LYSSA屬于彈狀病毒科成員之一,為不分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA病毒,全基因組長(zhǎng)度約為12kb,病毒基因組從3’端到5’端依次編碼有N、P、M、G和L共5種結(jié)構(gòu)蛋白。目前,已確認(rèn)LYSSA 7個(gè)基因型14種病毒,近幾年又有一些新待定的LYSSA報(bào)道。本研究通過狂犬病實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)化監(jiān)測(cè)核心技術(shù)的研究和探索,建立了LYSSA分子分型技術(shù)、狂犬病監(jiān)測(cè)信息報(bào)告及數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)和相關(guān)病毒實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)方法,從國(guó)家層面搭建了滿足多部門、多機(jī)構(gòu)狂犬病網(wǎng)絡(luò)化實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)和科學(xué)技術(shù)研究任務(wù)所需的技術(shù)方法和信息傳導(dǎo)及聯(lián)動(dòng)應(yīng)用平臺(tái)。通過初步應(yīng)用,對(duì)我國(guó)狂犬病流行毒株的種群及地域分布進(jìn)行了監(jiān)測(cè)與分析,揭示了我國(guó)狂犬病流行株的種群劃分情況及各種群地域分布特點(diǎn)：監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)我國(guó)首例輸入性實(shí)驗(yàn)室確診狂犬病病例,并對(duì)其進(jìn)行分子生物學(xué)特征分析與溯源分析：監(jiān)測(cè)獲得我國(guó)第一個(gè)北極相關(guān)群流行株的全基因組序列,并且對(duì)我國(guó)不同種群的基因組序列特征進(jìn)行了系統(tǒng)的比較和分析。本研究為進(jìn)一步提升我國(guó)狂犬病實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)化監(jiān)測(cè)能力提供了重要技術(shù)保障,相關(guān)應(yīng)用及分析揭示我國(guó)狂犬病流行與傳播的內(nèi)在規(guī)律,為科學(xué)預(yù)警與防控提供科學(xué)依據(jù)。第一章：狂犬病實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)化監(jiān)測(cè)技術(shù)的建立本研究首先從我國(guó)狂犬病疫情流行情況入手,通過對(duì)2013年中國(guó)狂犬病流行特征的分析,進(jìn)一步明確我國(guó)狂犬病的流行特征和分布特點(diǎn)。2013年我國(guó)狂犬病疫情總體呈現(xiàn)下降趨勢(shì),這是我國(guó)狂犬病在2007年達(dá)到新流行期頂峰后,連續(xù)第6個(gè)疫情下降的年份。我國(guó)狂犬病病例絕大多數(shù)發(fā)生在農(nóng)村地區(qū),流行與地域存在緊密聯(lián)系,報(bào)告病例仍然主要分布在長(zhǎng)江以南的省區(qū),雖然與近年監(jiān)測(cè)的疫情分布狀況近似,但與長(zhǎng)江以北地區(qū)的差距呈持續(xù)減小趨勢(shì),疫情地域蔓延趨勢(shì)異常明顯,疫情呈現(xiàn)由南向北,由高發(fā)向低發(fā)的不斷轉(zhuǎn)移,我們應(yīng)對(duì)此現(xiàn)象給予足夠的警惕和重視。為提高狂犬病實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)能力,針對(duì)狂犬病病毒屬各不同基因型病毒,利用PCR和基因測(cè)序技術(shù),成功建立LYSSA巢式RT-PCR檢測(cè)體系、LYSSA全基因組測(cè)序體系、LYSSA基因型快速鑒定方法及分型標(biāo)準(zhǔn)；利用計(jì)算機(jī)軟件開發(fā)技術(shù),建立基于現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)的狂犬病監(jiān)測(cè)信息報(bào)告及數(shù)據(jù)管理系統(tǒng),同時(shí)建立了多部門共享的人與動(dòng)物狂犬病相關(guān)的流行病學(xué)數(shù)據(jù)庫、病原學(xué)數(shù)據(jù)庫和基因數(shù)據(jù)庫,為進(jìn)一步提高狂犬病實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)化監(jiān)測(cè)能力提供堅(jiān)實(shí)的技術(shù)保障。第二章：狂犬病實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)化監(jiān)測(cè)平臺(tái)的應(yīng)用通過本研究所建立的狂犬病實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)化監(jiān)測(cè)技術(shù)平臺(tái),首先對(duì)我國(guó)狂犬病流行毒株的種群及地域分布進(jìn)行監(jiān)測(cè)與分析,完成標(biāo)本收集與檢測(cè)、序列測(cè)定和同源性比較及種系發(fā)生分析,涉及標(biāo)本8441份(384份陽性),分別來自人、犬、貓、鼬獾、鼠和牛等宿主。對(duì)截至目前幾乎所有的具有明確背景信息的中國(guó)狂犬病病毒N基因序列進(jìn)行下載整理后結(jié)合新測(cè)的序列,共452個(gè)流行株的序列進(jìn)行種系發(fā)生分析,覆蓋全國(guó)26個(gè)省區(qū),時(shí)間跨度47年(1969年-2015年)。結(jié)果顯示,我國(guó)狂犬病病毒可以分為China I-VI共6個(gè)毒株群,China I群仍然是目前我國(guó)狂犬病流行的最優(yōu)勢(shì)毒株群,分布范圍不僅貫穿南部,而且已經(jīng)擴(kuò)散到西部的甘肅和寧夏,引發(fā)當(dāng)?shù)仄届o多年后新的狂犬病流行,中部北部省區(qū)近年疫情上升期分離到的毒株也都屬于C hina I群,照此趨勢(shì),China I群的擴(kuò)散還會(huì)繼續(xù)向鮮有狂犬病病例報(bào)告的西部和東北部省區(qū)擴(kuò)散,引發(fā)當(dāng)?shù)匾咔榈纳仙�；除了China I群以外,China II群也是分布范圍廣、毒株數(shù)量較多的種群,本研究匯總China II群的分布范圍已擴(kuò)展到14個(gè)省區(qū),說明近年在數(shù)量和分布范圍上都在增長(zhǎng),China II群和China I群都是以犬為主要傳播宿主的種群,但分布于浙江、江西等地的野生動(dòng)物鼬獾的毒株卻絕大部分屬于China II群,極個(gè)別毒株屬于China I群,說明兩者宿主種類上分布的差異：China III群的數(shù)量雖然遠(yuǎn)低于China I群和China II群,但分布范圍比之前了解的大了很多,已擴(kuò)展至9個(gè)省區(qū),而且新疆、內(nèi)蒙古的牛、羊、駱駝等均屬于China III群,China III群是參與世界范圍循環(huán)的毒株群,新疆、內(nèi)蒙古的毒株還跟蒙古國(guó)、俄羅斯等國(guó)家的野生動(dòng)物毒株親緣關(guān)系較近；十幾年甚至二十多年沒有人狂犬病病例報(bào)告的青海和西藏分別于2012年和2015年開始報(bào)告狂犬病病例,其流行株歸屬于此前只在我國(guó)內(nèi)蒙古極少量發(fā)現(xiàn)的China IV群；China V群仍然只包括上世紀(jì)90年代初期之前的毒株,沒有參與1996年之后的第三個(gè)疫情流行高峰；China VI群仍局限在我國(guó)云南和廣西地區(qū)。監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)我國(guó)首例輸入性實(shí)驗(yàn)室確診狂犬病病例,并測(cè)定病毒N基因序列,通過系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示,中國(guó)目前流行的6個(gè)毒株群(ChinaI-VI)中,只在內(nèi)蒙古等省區(qū)小范圍循環(huán)的China IV群與該病例屬于同一大分支,但又有較大差異；與國(guó)際毒株比較發(fā)現(xiàn),該病例與印度毒株I_141以及RV61等毒株親緣關(guān)系較近,屬于Arctic-like-1群,是主要分布于中東和南亞的一支北極相關(guān)毒株群;病例在北京發(fā)病前曾在印度被猴子咬傷,種系發(fā)生分析證實(shí)其傳染源的確是印度野生動(dòng)物,進(jìn)一步證實(shí)該病例為狂犬病輸入病例。監(jiān)測(cè)獲得我國(guó)第一個(gè)北極相關(guān)群流行株的全基因組序列,并且對(duì)我國(guó)不同種群的基因組序列特征進(jìn)行了系統(tǒng)的比較和分析。第三章：相關(guān)病毒實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)方法的建立為進(jìn)一步提高我國(guó)應(yīng)對(duì)新發(fā)傳染病的綜合防控能力,實(shí)現(xiàn)2小時(shí)內(nèi)病原快速甄別,同時(shí)建立了LYSSA相關(guān)病毒的實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)方法。建立完成針對(duì)Flanders病毒(Flanders virus, FLAV)的TaqMan PCR檢測(cè)方法,引物與探針工作特異性良好,同一樣品重復(fù)檢測(cè)Ct值的變異系數(shù)均小于1.7%,定量分析模型靈敏度達(dá)到100 copies/PCR。建立完成針對(duì)Tahyna病毒(Tahyna virus, TAHV)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法,具有良好的靈敏性、特異性和穩(wěn)定性,同一樣品重復(fù)檢測(cè)Ct值的變異系數(shù)均小于5%,定量分析模型靈敏度達(dá)到10 copies/PCR。
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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R512.99

【參考文獻(xiàn)】

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1 袁慧君,王三虎,秦鄂德;狂犬病病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2004年06期

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本文編號(hào)：1671766