發(fā)布時間：2018-03-05 17:40

  本文選題：乙型肝炎表面抗原　切入點：乙型肝炎表面抗體　出處：《第四軍醫(yī)大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：背景乙型病毒性肝炎是影響人類健康的重要傳染病之一,疾病的早期診斷和抗病毒治療可有效地阻斷HBV傳播和降低HBV相關的疾病負擔。HBV血清學標志物是HBV診斷和病情評估的重要依據和指標。在日常HBV血清學檢驗中,常會出現一些不典型血清學模式,難以合理解釋。目前研究認為這些不典型的血清學表現可能與病毒或宿主免疫方面的改變相關。HBsAg與抗-HBs共存現象是一類較常見的不典型血清學模式,目前研究認為其發(fā)生可能與HBV S基因突變株相關,但其機制仍未充分闡明。由于既往研究樣本量和研究對象異質性的限制,對該現象的流行病學特征和臨床特征的認識仍存在爭議,對HBsAg與抗-HBs共存感染者中抗-HBs水平和親和力的研究也不足,因此HBsAg與抗-HBs共存現象的臨床意義尚未充分闡明。另外,對HBsAg與抗-HBs共存現象機制的研究均來自病例對照研究,盡管有少部分研究報道該現象可以持續(xù)存在,但缺乏對該現象自然轉歸的研究,即該現象的產生、血清學指標和病毒基因特征的變化趨勢、相關的預后轉歸均未見報道。目的通過系統(tǒng)綜述和Meta分析的方法了解和分析HBsAg與抗-HBs共存現象的流行病學特征和臨床特征,同時測定共存感染者血清抗-HBs的親和力常數,以明確其臨床意義。結合HBsAg陽性感染者隊列和HBsAg與抗-HBs共存感染者隊列的隨訪,探明HBs Ag與抗-HBs共存現象的自然轉歸和相關的影響因素。基于深度測序技術,結合HBsAg與抗-HBs共存現象的自然轉歸,分析其病毒準種的變化過程,進一步闡述病毒因素在HBsAg與抗-HBs共存現象發(fā)生過程中的作用。方法:1.檢索Pubmed、Medline、Web of Science、Embase和Cochrance等外文數據庫,查找HBsAg與抗-HBs共存現象相關文獻,同時通過手工檢索相關參考文獻進行補充。觀測結局指標包括:感染者年齡、性別、HBV DNA水平、ALT水平和“a”決定簇突變。連續(xù)變量采用平均差和95%置信區(qū)間表示、二分類變量用相對危險度和95%置信區(qū)間表示。采用I2檢驗分析納入研究的統(tǒng)計學異質性。2.以HBs Ag與抗-HBs共存感染者為病例組,以慢性HBV感染者為對照組,進行HBs Ag定量檢測,比較兩組感染者HBsAg水平的分布特征;在前期突變分析的基礎上進一步用Jameson-Wolf算法計算突變氨基酸序列與野生氨基酸序列的抗原性指數,分析突變位點引起的抗原性指數變化。同時以HBsAg與抗-HBs共存感染者為病例組,以疫苗接種者為對照組,進行抗-HBs定量檢測,采用競爭性酶聯免疫吸附試驗進行抗-HBs親和力常數測定,比較兩組人群抗-HBs水平的分布特征和親和力常數的大小。3.對HBs Ag陽性/抗-HBs陰性感染者每年進行一次隨訪,檢測其血清學指標,分析HBsAg與抗-HBs共存感染現象的發(fā)生率和影響因素。采用配對病例對照研究方法分析新發(fā)HBsAg與抗-HBs共存感染者在抗-HBs產生前后血清學指標和病毒序列特征的變化情況。同時對HBsAg與抗-HBs共存感染者進行隨訪,觀察其血清學指標和病毒序列特征的變化情況。4.選取6例新發(fā)HBsAg與抗-HBs共存感染者,擴增其S區(qū)基因片段,采用羅氏GS FLX+454進行深度測序,分析其準種構成,比較其在抗-HBs產生前后準種構成的變化情況,同時分析準種構成特征與血清指標間的相互關系。結果1.按檢索策略共檢索到文獻6867篇,最后納入文獻23篇,HBs Ag與抗-HBs共存感染者病例1709例,慢性HBV感染者對照18615例。Meta分析結果顯示,HBsAg陽性人群中,HBs Ag與抗-HBs共存現象的流行率約為4.15%(95%CI:4.00%~5.00%)。HBsAg與抗-HBs共存感染者年齡高于對照組(MD=1.96歲,95%CI:0.07~3.86,P=0.04);HBV DNA水平低于對照組(MD=0.30 log10 copies/ml,95%CI:0.05~0.55,P=0.02)。兩組感染者間HBe Ag陽性率(OR=1.15,95%CI:0.93~1.42,P=0.21)和ALT水平(MD=-4.05 IU/L,95%CI:-15.15~7.05,P=0.47)均無顯著性差異。HBsAg與抗-HBs共存感染者“a”決定簇126、129、130、131、133、134、135、138和145位點的突變率顯著高于對照組,存在統(tǒng)計學差異,而其他位點間未見統(tǒng)計學差異。2.HBsAg與抗-HBs共存感染者HBs Ag水平與慢性HBV感染者無統(tǒng)計學差異(2.99±0.80 vs 3.19±0.74 log IU/ml,F=2.12,P=0.15)�！癮”決定簇突變均引起HBsAg MHR和“a”決定簇抗原指數的顯著增加,其中MHR抗原性指數增加5.02(t=3.00,P=0.01),“a”決定簇指數增加4.21(t=2.83,P=0.02)。HBsAg與抗-HBs共存感染者的抗-HBs水平顯著低于疫苗接種者(1.69±0.53 vs 2.70±0.45 log IU/ml,F=4.18,P=0.04)。HBsAg與抗-HBs共存感染者的抗-HBs親和力常數為3.94±2.94 10-8 mol/l,疫苗接種者的抗體親和力常數為3.55±2.77 10-8 mol/l,兩組人群抗-HBs親和力常數間無統(tǒng)計學差異(t=0.34,P=0.74)。3.HBsAg陽性/抗-HBs陰性感染者隨訪結果顯示,HBsAg與抗-HBs共存現象的年均發(fā)生率為1.41±0.28%。影響抗-HBs產生的因素有年齡≥50歲(RR:1.02,95%CI:1.00~1.04,P=0.03),HBeAg陽性(RR:3.42,95%CI:1.90~6.17,P0.01),基線ALT異常(RR:3.65,95%CI:1.94~6.89,P0.01),HBV DNA水平≥20000 IU/ml(RR:2.25,95%CI:1.26~3.99,P0.01)。新發(fā)HBsAg與抗-HBs共存感染者在抗-HBs產生前后其HBsAg水平和ALT水平未見顯著性變化,但其HBV DNA水平顯著下降(t=3.26,P0.01)。HBsAg與抗-HBs共存感染者HBeAg陰轉率與未產生抗-HBs的HBe Ag陽性感染者(6/17 vs 209/548,P=0.89)無顯著性差異。序列特征分析顯示,擴增獲得的5對新發(fā)共存感染者HBV S基因片段中,有3對感染者其基因型與序列均未發(fā)生變化,剩余2對感染者在抗-HBs產生后出現“a”決定簇突變株。對HBsAg與抗-HBs共存感染者隨訪,共有效隨訪58例共存感染者,平均隨訪2.9±1.49年,其中有15例感染者發(fā)生抗-HBs轉陰,但其中5例感染者在隨后的隨訪中,又可檢測到抗-HBs,HBsAg與抗-HBs共存感染者發(fā)生抗-HBs陰轉的年均發(fā)生率為18.05%;有4例感染者HBsAg消失,年均發(fā)生率為7.69%;其余74.26%的感染者持續(xù)HBsAg與抗-HBs共存狀態(tài)。在持續(xù)共存現象的感染者中,觀察其血清學指標發(fā)現其HBs Ag水平(F=0.78,P=0.46)、抗-HBs水平(F=1.11,P=0.34)、HBV DNA水平(F=0.42,P=0.66)和ALT水平(F=0.39,P=0.68)均未見顯著性變化。序列特征分析顯示,擴增獲得的14對共存感染者HBV S基因片段中,有7對感染者存在“a”決定簇突變株,突變點位I126N、P127S、Q129N、Q129H、M133L、Y134N、Y134F、G145A,1對感染者未見“a”決定簇突變株,3對感染者隨訪后發(fā)生了S區(qū)“a”決定簇突變株的變化。4.在發(fā)生抗-HBs轉換的6例感染者中,4例感染者初始血清的優(yōu)勢毒株為野生株,其所占比例分別為99.01%、98.85%、99.38%和96.93%,2例感染者初始血清優(yōu)勢毒株為“a”決定簇突變株,其所占比例為89.89%和51.11%。在產生抗-HBs后,6例感染者優(yōu)勢毒株均未發(fā)生變化。同時其氨基酸和核苷酸水平的準種復雜度(P=0.39和P=0.51)、氨基酸和核苷酸水平的平均遺傳距離(P=0.68和P=0.86)、平均同義替換數(P=0.86)和平均非同義替代數(P=0.71)在抗-HBs轉換前后均無統(tǒng)計學差異。結論1.HBsAg與抗-HBs共存感染者HBV DNA水平低于慢性感染者,提示共存感染者體內病毒復制水平較慢性感染者低。HBsAg與抗-HBs共存感染者HBV“a”決定簇部分位點突變率顯著高于慢性感染者。2.HBsAg與抗-HBs共存感染者的抗-HBs親和力常數與疫苗接種者無顯著性差異,提示共存感染者的抗-HBs具有保護力�！癮”決定簇突變可引起HBs Ag“a”決定簇抗原指數的升高。3.HBsAg與抗-HBs共存現象是HBV自然發(fā)展過程的一類,慢性感染者可自然發(fā)展為HBsAg與抗-HBs共存感染者。影響這一進程的因素有基線HBV DNA水平、HBe Ag狀態(tài)、感染者年齡。在慢性感染者變?yōu)镠BsAg與抗-HBs共存感染者后,其HBV DNA水平降低,進一步提示抗-HBs具有保護性。4.在抗-HBs轉換前后,感染者優(yōu)勢毒株未發(fā)生變化。HBsAg與抗-HBs共存現象的產生并非由抗-HBs對“a”決定簇突變株的結合力降低而引起,而是慢性HBV感染者轉歸的一種。
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【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R512.62
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本文編號：1571250