本文選題：結(jié)核性腦膜炎　切入點(diǎn)：生物標(biāo)志物　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景 結(jié)核性腦膜炎（Tuberculous meningitis, TBM）是由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，約占結(jié)核病的7～10%，是以腦膜、大腦實(shí)質(zhì)受損為主，并可波及脊髓、脊膜的非化膿性炎癥。近年來由于人口流動(dòng)頻繁、免疫抑制劑廣泛應(yīng)用、耐藥性結(jié)核菌株的出現(xiàn)及人免疫缺陷病毒的流行，TBM發(fā)病率有逐漸增高的趨勢。而TBM的防治和診療過程中，早期準(zhǔn)確的診斷與預(yù)后和治療效果緊密相關(guān)聯(lián)，因此準(zhǔn)確有效的診斷方法在防治TBM中仍是當(dāng)今亟待解決的重要醫(yī)學(xué)問題。 當(dāng)前TBM的診斷主要依靠腦脊液（CSF）細(xì)胞、生化等檢查。然而在TBM發(fā)生早期，CSF細(xì)胞學(xué)、生化變化多不典型，早期TBM診斷十分困難。本實(shí)驗(yàn)擬采用iTRAQ標(biāo)記結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(iTRAQ—LC—MS／MS)的定量蛋白組學(xué)研究策略，，比較TBM患者和健康對照CSF蛋白質(zhì)表型，鑒定出TBM相關(guān)的差異蛋白質(zhì)，為探討TBM病理生理機(jī)制和篩選潛在診斷標(biāo)志物提供新的證據(jù)。 TBM常伴有血腦屏障的破壞，這使得TBM相關(guān)的代謝分子極易從CSF擴(kuò)散至外周血液，提示檢測TBM血液的代謝改變有望發(fā)現(xiàn)其潛在診斷標(biāo)志物。本實(shí)驗(yàn)擬采用核磁共振（NMR）的代謝組學(xué)方法，篩選出TBM的潛在血液診斷標(biāo)志物。 目的 1.采用iTRAQ的定量蛋白組學(xué)技術(shù)，分析TBM和正常的腦脊液蛋白質(zhì)改變、篩選并驗(yàn)證TBM的潛在CSF蛋白質(zhì)診斷標(biāo)志物； 2.采用核磁共振（NMR）的代謝組學(xué)方法，比較結(jié)核性腦膜炎患者與正常對照的血漿代謝譜，篩選TBM的潛在血漿代謝診斷標(biāo)志物。 方法 1.第一部分：通過iTRAQ標(biāo)記蛋白組學(xué)方法，比較TBM疾病組（n=12）和正常對照(n=12)腦脊液蛋白譜，通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）鑒定TBM相關(guān)的腦脊液差異蛋白，通過生物信息學(xué)分析對差異蛋白進(jìn)行功能注釋和通路分析。進(jìn)一步將篩選出的潛在的生物標(biāo)志物蛋白進(jìn)行WB驗(yàn)證，并構(gòu)建診斷模型進(jìn)行診斷效能評估。 2.第二部分：采用核磁共振（NMR）的代謝組學(xué)方法，比較結(jié)核性腦膜炎患者與正常對照的血漿代謝譜，篩選出結(jié)核性腦膜炎患者相對于健康對照者的血漿差異代謝物；分析差異代謝物的分子功能，初步探討這些血漿差異代謝物在結(jié)核性腦膜炎發(fā)病中的潛在作用。 結(jié)果 １．使用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒別出81例差異蛋白質(zhì)，對這部分蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，結(jié)果顯示這些蛋白質(zhì)的功能主要與凝血級聯(lián)反應(yīng)，炎癥反應(yīng)，細(xì)胞粘附密切相關(guān)。WB蛋白印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果指出NELL2水平在TBM疾病組相對于健康對照組呈現(xiàn)顯著下降。ROC曲線分析結(jié)果提示NELL2的診斷效能：83.3%的敏感性和75%的特異性。該結(jié)果提示NELL2是TBM具有良好診斷效能的潛在生物標(biāo)志物。 ２．采用核磁共振（NMR）偶聯(lián)OPLS-DA的統(tǒng)計(jì)方法鑒定出TBM血漿相對于正常對照中的差異代謝物如下：有24個(gè)血漿差異代謝物質(zhì)在結(jié)核性腦膜炎組與正常組區(qū)分中起主要作用（VIP1.0）。N-乙酰糖蛋白（N-acetylglycoprotein）、丙酮酸鹽(Pyruvate)、葡萄糖（Glucose）、煙酰胺（Nicotinamide）、1-甲基組氨酸（1-Methylhistidine）、葡萄糖-內(nèi)酯（Glucono-delta-lactone）在結(jié)核性腦膜炎中的表達(dá)量增高；低密度脂蛋白（LDL）、極低密度脂蛋白（VLDL）、脂質(zhì)（Lipid）、異亮氨酸（Isoleucine）、亮氨酸（Leucine）、纈氨酸（Valine）、谷氨酸（Glutamine）、蛋氨酸（Methoinine）、組氨酸（Histidine）、3-羥基丁酸酯（3-Hydroxybutyrate）、乙酸（Acetate）、丙酮(Acetone)、乙醇（Ethanol）、磷酸膽堿（PC）、甘油磷酸膽堿（GPC）、乙酰乙酸（Acetoacetate）、谷氨酰胺（Glutamate）、 N-甲基煙酰胺（N-Methylnicotinamide）在結(jié)核性腦膜炎中的表達(dá)量降低。四種生物標(biāo)志物N-乙酰糖蛋白（N-acetylglycoprotein）、煙酰胺（Nicotinamide）、葡萄糖（α-Glucose，β-Glucose）經(jīng)二元Logistical Regression分析，在訓(xùn)練集中可區(qū)分結(jié)核性腦膜炎患者與正常對照，AUC值為0.810。在測試集中，這四種生物標(biāo)志物可區(qū)分12例結(jié)核性腦膜炎患者與13例正常對照，AUC值為0.827。在病毒性腦膜炎與結(jié)核性腦膜炎訓(xùn)練集中，這四種生物標(biāo)志物的AUC值為0.782。 結(jié)論 1. NELL2可作為TBM潛在的生物標(biāo)志物。 2.通過TBM患者血漿的代謝組學(xué)分析，我們鑒定出TBM相關(guān)的血漿差異代謝物質(zhì)。分析這些差異代謝物質(zhì)的分子功能，并采用獨(dú)立樣本驗(yàn)證相關(guān)差異代謝物的臨床診斷價(jià)值，為尋找TBM的客觀診斷方法提供了候選標(biāo)志物。
[Abstract]:background
Tuberculous meningitis (Tuberculous meningitis, TBM) by Mycobacterium tuberculosis (Mycobacterium, tuberculosis, MTB) of central nervous system diseases caused by infection, accounting for about 7 to 10% TB, with meninges, brain parenchyma damage, and can spread to the spinal cord, spinal non suppurative inflammation. In recent years due to the floating population frequently, widely used immunosuppressant, emergence of drug-resistant strains of TB and HIV epidemic, has gradually increased the incidence rate of TBM. And the prevention and treatment of TBM in diagnosis and prognosis and treatment effect of accurate early closely related, so the medical problem diagnosis method is accurate and effective in the prevention and treatment of TBM is still an urgent.
The diagnosis of TBM mainly depends on the cerebrospinal fluid (CSF) cells, biochemical examination. However, in the early TBM, CSF cytology, biochemical changes are atypical, TBM early diagnosis is very difficult. This study combined with liquid chromatography tandem mass spectrometry using iTRAQ markers (iTRAQ - LC - MS / MS) the study strategy of quantitative protein group TBM patients and healthy controls CSF protein phenotype, identified differentially expressed proteins related to TBM, TBM to explore the pathophysiological mechanism and screening of potential diagnostic biomarkers provide new evidence.
TBM is often accompanied by the destruction of the blood-brain barrier, the metabolism of TBM related molecules easily from the diffusion of CSF to peripheral blood, prompt detection of TBM blood metabolic change is expected to find the potential diagnostic markers. This study using magnetic resonance imaging (NMR) metabonomics was screened for potential blood biomarkers in the diagnosis of TBM.
objective
1. the quantitative proteomic techniques of iTRAQ were used to analyze the protein changes in TBM and normal cerebrospinal fluid, and to screen and verify the potential diagnostic markers of the potential CSF protein of TBM.
2., we used nuclear magnetic resonance (NMR) metabonomics to compare the plasma metabolic profiles of tuberculous meningitis patients and normal controls, and screened the potential diagnostic markers of plasma metabolism of TBM.
Method
The 1. part: the first method by iTRAQ marker protein group, TBM disease group (n=12) and normal control (n=12) of cerebrospinal fluid protein, by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) identification of TBM cerebrospinal fluid is related to the difference of the protein by bioinformatics analysis and functional annotation of proteins. The potential difference pathway the biomarker protein will be further screened for WB verification, and establish the diagnostic model for the diagnostic efficacy evaluation.
The second part 2.: using magnetic resonance imaging (NMR) metabonomics approach, comparison of tuberculosis meningitis in patients with normal plasma metabolic control spectrum, screened patients with tuberculous meningitis compared with healthy controls the difference of plasma metabolites; analysis of molecular function of different metabolites, preliminary study on the potential role of plasma metabolites in the pathogenesis of these differences in tuberculous meningitis in.
Result
1. using iTRAQ quantitative proteomics technique to identify 81 cases of differential proteomics, bioinformatics analysis of the protein, the results show that these proteins function and coagulation cascade reaction, inflammatory reaction, cell adhesion is closely related to.WB blot experiment results indicate that the NELL2 level of healthy control group showed significantly decreased.ROC curve analysis showed that the diagnostic value of NELL2 in the TBM group: compared with the sensitivity of 75% and specificity of 83.3%. The results suggest that NELL2 is a potential biomarker for TBM has good diagnostic performance.
2. using nuclear magnetic resonance (NMR) statistical method of coupling OPLS-DA identified TBM plasma metabolites in difference compared to normal control as follows: there are 24 different plasma metabolites play a major role in differentiating tuberculous meningitis group and normal group (VIP1.0).N- glycoprotein (N-acetylglycoprotein), acetyl pyruvate (Pyruvate), glucose (Glucose), nicotinamide (Nicotinamide), 1- methylhistidine (1-Methylhistidine), glucose (Glucono-delta-lactone) - lactone expression in tuberculous meningitis increased; low density lipoprotein (LDL), very low density lipoprotein (VLDL), lipid (Lipid), isoleucine (Isoleucine), leucine, valine ((Leucine) Valine), glutamic acid (Glutamine), methionine (Methoinine), histidine (Histidine), 3- hydroxybutyrate (3-Hydroxybutyrate), acetic acid (Acetate), acetone (Acetone), ethanol (Ethanol), choline phosphate (PC), Glycerophosphorylcholine (GPC), acetoacetate (Acetoacetate), glutamine (Glutamate), N- (N-Methylnicotinamide) methylnicotinamide expression in tuberculous meningitis decreased. Four biomarkers of N- glycoprotein (N-acetylglycoprotein), acetyl nicotinoyl amine (Nicotinamide), glucose (-Glucose alpha, beta -Glucose) analyzed by two yuan Logistical Regression, in the training set can distinguish patients with tuberculous meningitis and normal control, AUC value of 0.810. in the test set, these four biomarkers can differentiate 12 cases of tuberculous meningitis patients and 13 cases of normal control, AUC value of 0.827. in viral meningitis and tuberculous meningitis in the training set, the four species the AUC value of 0.782. markers
conclusion
1. NELL2 can be used as a potential biomarker for TBM.
The 2. group of TBM patients by metabolic analysis, we identified the differences related to the metabolism of plasma TBM. Molecular analysis of functional metabolites of these differences, and by independent sample validation related clinical diagnostic value of different metabolites, as objective diagnostic methods for TBM has provided the candidate markers.

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R529.3

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周順英;;重型結(jié)核性腦膜炎的綜合治療[J];西藏醫(yī)藥雜志;2007年01期

2 尹淑芹;杜玉萍;;50例成人結(jié)核性腦膜炎治療探討[J];吉林醫(yī)學(xué);2007年03期

3 朱樹花;王翠蘭;;結(jié)核性腦膜炎128例誤診分析[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年02期

4 吳慶國;張凱;;結(jié)核性腦膜炎27例臨床分析[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2007年04期

5 林琳;高揚(yáng);劉國輝;;結(jié)核性腦膜炎86例分析[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2007年03期

6 陳雁斌;王成宏;馮丙東;;結(jié)核性腦膜炎39例臨床分析[J];延安大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2007年01期

7 邵慧軍;;早期結(jié)核性腦膜炎與病毒性腦膜炎的臨床鑒別[J];浙江醫(yī)學(xué);2007年06期

8 張德和;王舜;彭春仙;姚京忠;;結(jié)核性腦膜炎患者血鈉監(jiān)測的臨床意義[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2007年08期

9 蒼愛澤;;結(jié)核性腦膜炎30例的臨床分析[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2007年11期

10 鄭慧;陳民;;結(jié)核性腦膜炎43例護(hù)理體會(huì)[J];齊魯護(hù)理雜志;2007年11期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張文麗;;二例初治耐多藥結(jié)核性腦膜炎淺析[A];2010年中國防癆協(xié)會(huì)臨床/基礎(chǔ)專業(yè)學(xué)術(shù)大會(huì)匯編[C];2010年

2 邱薇;潘雪葵;胡庶明;黃紹梅;;抗結(jié)核治療好轉(zhuǎn)過程中出現(xiàn)的無典型癥狀結(jié)核性腦膜炎5例報(bào)告[A];中國防癆雜志2003第25卷增刊——2003年中國防癆協(xié)會(huì)全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2003年

3 常東兵;;立復(fù)欣治療結(jié)核性腦膜炎之臨床觀察[A];中國防癆雜志2003第25卷增刊——2003年中國防癆協(xié)會(huì)全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2003年

4 陳弟莉;陳陽美;;結(jié)核性腦膜炎50例臨床分析[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

5 常小琳;楊毅寧;戴文;張敏;粟秀初;趙鋼;;結(jié)核性腦膜炎的實(shí)驗(yàn)室檢查分析[A];第十一屆全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

6 謝本維;汪中濤;孟繁平;;西藏結(jié)核性腦膜炎預(yù)后相關(guān)因素分析[A];結(jié)核病和呼吸疾病診治進(jìn)展及治療中肝損害專題研討會(huì)資料匯編[C];2013年

7 薛長虎;吳軍;洪建華;;30例結(jié)核性腦膜炎臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

8 胡佳;張家堂;郎森陽;蒲傳強(qiáng);;47例結(jié)核性腦膜炎誤診分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

9 胡佳;張家堂;郎森陽;蒲傳強(qiáng);;167例結(jié)核性腦膜炎臨床研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 崔玉森;吳平;于燕華;王翠芝;;重癥結(jié)核性腦膜炎護(hù)理對策[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 主任醫(yī)師 容小翔;結(jié)核性腦膜炎會(huì)影響小兒智力嗎[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2008年

2 寧在蘭;謹(jǐn)防小兒結(jié)核性腦膜炎[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2006年

3 本報(bào)記者 朱曉京　胡曉震;留心疑似癥狀 謹(jǐn)防結(jié)核性腦膜炎[N];沈陽日報(bào);2010年

4 吉林省結(jié)核病醫(yī)院主管護(hù)師 于英杰;結(jié)核性腦膜炎：密切觀察病情變化[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

5 李杰　呂音;結(jié)核性腦膜炎孕婦產(chǎn)下健康男嬰[N];健康報(bào);2007年

6 張齊龍;結(jié)核性腦膜炎病人如何早發(fā)現(xiàn)[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

7 東城結(jié)核病防治所;預(yù)防小兒結(jié)核性腦膜炎[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2008年

8 劉麗;結(jié)核性腦膜炎的診與治[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2007年

9 杭州 李鳧堅(jiān);認(rèn)識(shí)結(jié)核性腦膜炎[N];家庭醫(yī)生報(bào);2004年

10 曉風(fēng);腰穿放夜及鞘注新法結(jié)核性腦膜炎療程縮短一半[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 陳沛冬;腦脊液置換加鞘注異煙肼及地塞米松在結(jié)核性腦膜炎治療中的價(jià)值—薈萃分析[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

2 楊笑;結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液單核細(xì)胞內(nèi)結(jié)核抗原檢測的應(yīng)用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 農(nóng)媛;影響結(jié)核性腦膜炎預(yù)后因素的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2008年

2 徐成龍;70例結(jié)核性腦膜炎的回顧性分析[D];延邊大學(xué);2012年

3 陳弟莉;結(jié)核性腦膜炎50例臨床分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

4 王麗;結(jié)核性腦膜炎的臨床分析與實(shí)驗(yàn)研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2009年

5 朱飛;結(jié)核性腦膜炎腦脊液檢測診斷價(jià)值研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2012年

6 郭芬;200例結(jié)核性腦膜炎臨床分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

7 魏若男;不同劑量異煙肼治療結(jié)核性腦膜炎的療效和不良反應(yīng)分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

8 劉巧;327例結(jié)核性腦膜炎與96例隱球菌性腦膜炎臨床分析[D];四川大學(xué);2007年

9 鄒月麗;結(jié)核性腦膜炎的早期診斷及其發(fā)病機(jī)制的探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

10 李紅;磁共振增強(qiáng)減影技術(shù)在結(jié)核性腦膜炎中的運(yùn)用[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

本文編號(hào)：1562523