本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用套式PCR技術(shù)鑒定人糞中鉤蟲卵　出處：《大理學(xué)院》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:從人類糞便標(biāo)本中提取鉤蟲卵DNA利用套式PCR技術(shù)對(duì)寄生人糞的主要鉤蟲卵進(jìn)行分類鑒定,探索通過(guò)從人類糞便中對(duì)鉤蟲進(jìn)行分類鑒定與診斷的新方法。內(nèi)容與方法:實(shí)驗(yàn)分為現(xiàn)場(chǎng)采樣和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)兩部分,現(xiàn)場(chǎng)工作主要是收集云南省西雙版納傣族自治州景洪市和勐�？h多所小學(xué)四年級(jí)學(xué)生的糞便樣本,采用改良加藤法對(duì)每份糞便樣本進(jìn)行“一糞三檢”,經(jīng)鏡檢確定寄生蟲蟲卵類型并且對(duì)各種蟲卵分別進(jìn)行計(jì)數(shù),選取鏡檢含鉤蟲卵的39份糞便樣本作為陽(yáng)性樣本和選21份不含鉤蟲卵(部分包含蛔蟲)以及不含任何蟲卵的糞便樣本作為陰性對(duì)照樣本。將樣本置于95%的乙醇中于4℃冰箱保存準(zhǔn)備下一步檢測(cè);實(shí)驗(yàn)室中將收集的標(biāo)本采用用套式PCR擴(kuò)增internal transcribed spacer 2(ITS-2)目的基因,測(cè)序并進(jìn)一步BLAST比對(duì),確定鉤蟲種類;以此PRC產(chǎn)物片段為標(biāo)志物,瓊脂糖凝膠電泳判定陽(yáng)性,即鑒定蟲種。結(jié)果:經(jīng)套式PCR擴(kuò)增,通過(guò)BLAST比對(duì),DNA序列與美洲鉤蟲核糖體基因的相似率均在99%,有1份樣本與錫蘭鉤蟲核糖體基因的相似率均在99%,即鑒定為美洲鉤蟲和犬鉤蟲。其檢測(cè)敏感性92.31%(36/39),特異性33.33%(7/21);鏡檢和套式PCR檢測(cè)結(jié)果經(jīng)X2檢驗(yàn),X2=4.747,P=0.029,兩種檢測(cè)方法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,套式PCR檢出率(50/60)高于鏡檢(39/60)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)建立了利用套式PCR對(duì)糞便中鉤蟲卵進(jìn)行分型鑒定和檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法,并其檢出率較改良加藤厚涂片鏡檢法高,為實(shí)現(xiàn)通過(guò)糞檢對(duì)多種鉤蟲進(jìn)行快速鑒別診斷奠定了初步的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本次研究在云南首次發(fā)現(xiàn)了錫蘭鉤蟲(犬鉤蟲)的感染病例,提示云南鉤蟲病流行存在人畜共患的風(fēng)險(xiǎn),值得進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：大理學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R532.12

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1324003