發(fā)布時間：2017-11-01 10:23

  本文關(guān)鍵詞：豬弓形蟲抗體間接ELISA方法的建立及膠體金試紙條的制備

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【摘要】：弓形蟲病是一種由細(xì)胞內(nèi)寄生的原蟲--弓形蟲引起的人獸共患病�？梢愿腥景ㄈ�,家畜、家禽、海洋哺乳動物和鳥類等所有溫血動物。豬是弓形蟲重要的中間宿主,在弓形蟲和弓形蟲病的傳播過程中起到十分重要的作用。免疫膠體金檢測法(ICT)作為一種簡單、便捷的血清學(xué)診斷方法,無需實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備,無需技術(shù)人員操作,適合大量樣本的初步篩選,尤其適合畜禽場及野外檢測。弓形蟲致密顆粒蛋白家族中的GRA7在宿主體內(nèi)持續(xù)性表達(dá),在速殖子和緩殖子階段均可誘導(dǎo)機(jī)體的免疫反應(yīng),是潛在的弓形蟲血清學(xué)診斷的具有較高價(jià)值的一類分泌抗原。本研究利用重組蛋白GRA7制備弓形蟲抗體膠體金試紙條,為實(shí)際應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。1.利用重組蛋白GRA7建立豬弓形蟲抗體間接ELISA方法確定重組蛋白GRA7的包被濃度為5μg/mL、孵育條件為4℃過夜;最佳封閉液濃度為5%(m/v)的脫脂奶粉;豬血清和二抗的工作濃度分別為1:50和1:100,000,作用時間均為90min;TMB最佳顯色時間為18min。利用該法檢測176份豬血清,與膠體金準(zhǔn)ELISA相比,特異性、敏感性分別為93.3%、83.3%,AUC曲線分析結(jié)果顯示,GRA7-ELISA曲線下面積為0.922,說明該方法穩(wěn)定性很好。以上結(jié)果表明:重組蛋白GRA7作為血清學(xué)診斷抗原效果良好,可應(yīng)用于制備膠體金試紙條。2.利用重組蛋白GRA7制備弓形蟲抗體檢測膠體金試紙條重組蛋白GRA7標(biāo)記膠體金的最佳濃度和最佳標(biāo)記pH分別為7.5μg/mL和pH9.0。檢測線(Test line)重組抗原GRA7的最佳劃線濃度為1mg/mL,質(zhì)控線(Control line)兔抗GRA7抗體的最佳劃線濃度為1mg/mL。176份豬血清的GRA7-ICT檢測結(jié)果與Gold-ELISA比較,特異性和敏感性分別是91.4%、83.0%。兩種檢測方法結(jié)果吻合樣品的Kappa=0.7570,具有較高的一致性。
【關(guān)鍵詞】：豬 弓形蟲 重組蛋白GRA7 ELISA 膠體金
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R531.8
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-8
• 第一章 文獻(xiàn)綜述8-16
• 1.1 弓形蟲及弓形蟲病8-9
• 1.2 不同人群的弓形蟲感染9-10
• 1.3 豬與弓形蟲傳播10
• 1.4 弓形蟲病診斷方法10-13
• 1.5 常用檢測抗體13-14
• 1.6 弓形蟲GRA7蛋白14
• 1.7 弓形蟲病的預(yù)防與治療14-16
• 第二章 利用重組蛋白GRA7建立豬弓形蟲抗體間接ELISA方法16-26
• 2.1 材料16-18
• 2.2 方法18-21
• 2.3 結(jié)果21-24
• 2.4 討論24-25
• 2.5 小結(jié)25-26
• 第三章 豬弓形蟲抗體膠體金試紙條的制備26-43
• 3.1 材料26-27
• 3.2 方法27-34
• 3.3 結(jié)果34-41
• 3.4 討論41-42
• 3.5 小結(jié)42-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-51
• 縮略詞表51-52
• 作者簡介52-53
• 致謝53

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本文編號：1126406