發(fā)布時(shí)間：2017-10-31 20:05

  本文關(guān)鍵詞：人G1型輪狀病毒TaqMan熒光定量檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用

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【摘要】：目的本研究旨在建立一種快速準(zhǔn)確定量檢測(cè)人G1型輪狀病毒的TaqMan探針熒光實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法。方法以輪狀病毒VP6基因?yàn)榘谢?分別設(shè)計(jì)2對(duì)引物及其相應(yīng)的TaqMan探針,擴(kuò)增目的片段,將目的片段克隆于PCDNA3.1+載體上,體外轉(zhuǎn)錄獲得RNA,系列稀釋后為標(biāo)準(zhǔn)品,建立TaqMan探針熒光定量實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法并對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)找到最優(yōu)條件下的引物濃度(250nmol/L)、探針濃度(300nmol/L);通過(guò)對(duì)引起腹瀉的人柯薩奇病毒、呼腸孤病毒等進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果均為陰性,表明該方法具有很好的特異性。該方法的最低檢測(cè)量為5copies/μL。對(duì)該方法進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)變異率均小于1%,重復(fù)性好。用已建立的方法對(duì)4份糞便臨床樣品進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn),病毒RNA的檢出率為100%。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)初步建立了人G1型輪狀病毒TaqMan探針熒光實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)方法,為G1型輪狀病毒的診斷、檢測(cè)和分子流行病學(xué)研究提供了一種新的方法。
【作者單位】： 昆明理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院昆明理工大學(xué)附屬醫(yī)院;昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院云南省分子醫(yī)學(xué)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 人輪狀病毒 VP基因 TaqMan熒光定量PCR
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2014BAI01B01)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R440;R512.5
【正文快照】： (1.The Affiliated Hospital of Kunming University of Science and Technology,Kunming650034,China2.Kunming University of Science and technology,faculty of life science and technology,Yunnan Provincial research center of molecular medicine,Kunming650034,Chin

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1 李曉婉;陳琦;金t，

本文編號(hào)：1123537