發(fā)布時(shí)間：2017-09-21 06:00

  本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌α-溶血素及其突變體的原核表達(dá)和免疫學(xué)活性

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【摘要】：目的原核表達(dá)金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)α-溶血素(α-hemolysin,Hla)及其突變體,并檢測其免疫學(xué)活性。方法采用PCR法從S.aureus中擴(kuò)增hla基因,將該基因克隆至原核表達(dá)載體p ET28a中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET28a-hla,并利用點(diǎn)突變試劑盒進(jìn)行突變,獲得重組質(zhì)粒p ET28a-hlaH35L。將兩種重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá);表達(dá)的重組蛋白經(jīng)Ni-NTA親和層析和CM離子交換層析純化后,檢測其溶血活性、免疫血清的抑制溶血活性及HlaH35L蛋白的免疫保護(hù)作用。結(jié)果重組表達(dá)質(zhì)粒p ET28a-hla經(jīng)雙酶切和測序證明構(gòu)建正確;重組質(zhì)粒p ET28a-hlaH35L的測序結(jié)果顯示,第35位氨基酸突變位點(diǎn)與設(shè)計(jì)相符。表達(dá)的Hla和HlaH35L蛋白相對分子質(zhì)量約為36 000,均為可溶性表達(dá),表達(dá)量約占菌體總蛋白的50%,純化后純度均在90%以上。Hla具有溶血活性,溶血比活為152 HU/mg;HlaH35L無溶血活性;抗Hla和抗HlaH35L血清均具有抑制Hla溶血的活性;在小鼠滴鼻攻擊模型中,HlaH35L具有一定的保護(hù)作用。結(jié)論成功在大腸埃希菌中表達(dá)了具有良好免疫學(xué)活性的Hla及其突變體HlaH35L,為篩選S.aureus候選疫苗組分奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 上海生物制品研究所有限責(zé)任公司;
【關(guān)鍵詞】： 金黃色葡萄球菌 α-溶血素 原核細(xì)胞 基因表達(dá) 溶血活性 免疫保護(hù)
【分類號】：Q786;R392-33
【正文快照】： 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一種革蘭陽性條件致病菌,廣泛分布于自然界。S.aureus是人類化膿感染中最常見的病原菌,可引起局部化膿感染,也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎,甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。S.aureus的毒力因子主要包括莢膜多糖、黏附素、

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本文編號：892758