本文關(guān)鍵詞：酵母雙雜交篩選與CVB3 3A相互作用的人心臟蛋白

  更多相關(guān)文章： 酵母雙雜交 CVB A

【摘要】：目的以CVB3非結(jié)構(gòu)蛋白3A為誘餌,從人心臟cDNA文庫中篩選與其相互作用的宿主蛋白,對陽性cDNA克隆進行初步分析和鑒定。方法構(gòu)建pGBKT7-3A重組質(zhì)粒,Western Blot檢測3A融合蛋白的表達;利用酵母雙雜交技術(shù)篩選人心臟cDNA文庫,經(jīng)PCR擴增cDNA插入片段和Alu I酶切等實驗將陽性克隆歸類,并通過測序、相似性比對分析和回返配合實驗去除假陽性蛋白。結(jié)果成功構(gòu)建誘餌質(zhì)粒pGBKT7-3A,Western Blot結(jié)果表明,pGBKT7-3A重組質(zhì)粒在酵母菌中成功表達3A融合蛋白;經(jīng)雙雜交篩選和回返配合實驗,獲得了7個相互作用的蛋白,分別為:蘭尼堿受體2(Ryanodine Receptor 2,RyR2),信號肽酶2(Signal peptidase complex subunit 2,SPCS2),跨膜蛋白emp24(Transmembrane emp24protein transport domain containing 4,TMED4),細胞色素c氧化酶亞基I(Cytochrome c oxidase subunit I,COX1),細胞色素c氧化酶亞基III(Cytochrome c oxidase subunit III,COX3),肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain,MYH7)和琥珀酸脫氫酶亞基D(Succinate dehydrogenase complex subunit D,SDHD)。結(jié)論應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù),以CVB3 3A為誘餌蛋白,從人心臟cDNA文庫中獲得7種不同的陽性基因:RyR2、SPCS2、TMED4、COX1、COX3、MYH7和SDHD,在分子水平上探索3A蛋白的新功能。
【作者單位】： 南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室;南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院檢驗系;南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系;南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 酵母雙雜交 CVB A
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81160196,No.30660010) 江西省青年科學(xué)家培養(yǎng)項目年度計劃資助(20133BCB23005) 江西省研究生創(chuàng)新專項資金項目(No.YC2012-S020)聯(lián)合資助~~
【分類號】：R373
【正文快照】： 柯薩奇B3病毒歸類于小RNA病毒科腸道病毒屬,能引起人類病毒性心肌炎、無菌性腦膜炎、胰腺炎,甚至新生兒死亡等多種疾病。腸道病毒基因組為單股正鏈RNA,長約7.5kb,兩端為非編碼區(qū),中間為連續(xù)開放讀碼框,編碼一個多聚蛋白。多聚蛋白經(jīng)酶切后形成病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白,3A是

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉發(fā)娣;余克花;羅達亞;徐秋芳;莫冰;羅軍;劉晶星;黃孝天;;酵母雙雜交技術(shù)篩選與CVB3 VP1直接作用的細胞蛋白[J];中國人獸共患病學(xué)報;2009年10期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 蔡興懷;江海洋;;植物L(fēng)IM蛋白家族研究進展[J];黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年06期

2 金桂林;莫冰;劉發(fā)娣;徐秋芳;劉昕;應(yīng)穎;趙穎潔;羅軍;黃孝天;;CVB3損傷HeLa細胞高爾基體結(jié)構(gòu)的機制研究[J];中國人獸共患病學(xué)報;2012年06期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李映新;17-甲氧基-7-羥基-苯駢呋喃查爾酮對心肌細胞離子通道作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 蘇正秀;鹽對CRF大鼠的心臟磷酸化蛋白質(zhì)組及OVLT內(nèi)RAS的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

2 吳瑤;纈沙坦對心衰幼鼠心肌細胞內(nèi)鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ干預(yù)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

3 金桂林;CVB3 VP1與宿主蛋白MAT1相互作用的研究[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

4 張林;發(fā)形霞水母觸手提取物的心臟毒性及其作用機制探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 徐薇,沈燕,陳瑞珍,熊思東;含融內(nèi)體多肽的新型B3型柯薩奇病毒DNA疫苗對小鼠病毒性心肌炎的預(yù)防作用[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2004年04期

2 黃孝天,陳洪,吳峗,陳宏新,劉晶星;重組柯薩奇B3病毒VP1基因的穿梭表達載體的構(gòu)建及鑒定[J];中國人獸共患病雜志;2004年05期

3 黃孝天,陳宏新,陳洪,吳斌貝,劉晶星;柯薩奇病毒B3型VP1基因在釀酒酵母中的表達[J];中國人獸共患病雜志;2005年07期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 施瓊;翁亞光;;酵母雙雜交系統(tǒng)篩選Mps1相互作用蛋白[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2006年06期

2 李鐵強;吳永英;范洪臣;王立群;;酵母雙雜交系統(tǒng)研究進展[J];生物信息學(xué);2008年01期

3 孫玉寧,李春榮,靳更林;酵母質(zhì)粒PCR擴增及酶切在酵母雙雜交中的運用[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年03期

4 劉卉;潘欣;李慧艷;張佩景;李衛(wèi)華;張學(xué)敏;周濤;;應(yīng)用酵母雙雜交篩選與CUEDC2相互作用的蛋白質(zhì)[J];生物技術(shù)通訊;2007年05期

5 武君;沈秀張;林吉進;;蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2008年02期

6 王，

本文編號：881089