本文關(guān)鍵詞：雌激素及雌激素受體α減輕谷氨酸對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷

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【摘要】：目的:建立谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷模型,觀察雌激素及雌激素受體α(estrogen receptorα,ERα)對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷的作用。方法:原代培養(yǎng)小鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫組化染色鑒定神經(jīng)元的純度。建立谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷模型。用前期實(shí)驗(yàn)中已構(gòu)建成功的ERα重組慢病毒(V-ERα-RFP-flag)感染經(jīng)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blotting檢測(cè)ERαmRNA和蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)分為3組:(1)對(duì)照組:用空慢病毒(V-RFP-flag)感染經(jīng)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞;(2)雌激素組:用雌激素干預(yù)經(jīng)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞;(3)慢病毒組:用V-ERα-RFP-flag感染經(jīng)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率;實(shí)時(shí)熒光定量PCR及免疫熒光染色檢測(cè)各組神經(jīng)細(xì)胞中N-甲基-D-天冬氨酸受體1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白1(vesicular glutamate transporter protein 1,VGLUT1)的變化。結(jié)果:成功原代培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞,經(jīng)NSE免疫組化方法鑒定神經(jīng)元純度大于90%。成功建立經(jīng)谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷模型。MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神經(jīng)細(xì)胞72 h后,在熒光顯微鏡觀察下可見(jiàn)到紅色熒光表達(dá),與對(duì)照病毒相比,能增加神經(jīng)細(xì)胞中ERαmRNA和蛋白表達(dá)水平(P0.01)。與對(duì)照組相比,雌激素組和慢病毒組細(xì)胞凋亡率降低(P0.05),且實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,雌激素組和慢病毒組的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表達(dá)降低(P0.05),免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示NMDAR1和VGLUT1陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)減少(P0.01)。結(jié)論:雌激素和ERα能減輕谷氨酸對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損傷效應(yīng),該保護(hù)作用可能通過(guò)抑制NMDAR1和VGLUT1的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。
【作者單位】： 貴州省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;臨沂市婦幼保健院兒科;貴州省人民醫(yī)院小兒內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 雌激素 雌激素受體α 谷氨酸 神經(jīng)元
【基金】：貴州省科技廳攻關(guān)項(xiàng)目(No.黔科合sy[2009]3054) 貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長(zhǎng)專(zhuān)項(xiàng)資金資助項(xiàng)目(No.黔省專(zhuān)合字[2010]86)
【分類(lèi)號(hào)】：R363
【正文快照】： 谷氨酸(glutamate,Glu)廣泛分布于哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS),是腦內(nèi)含量最豐富的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),在突觸可塑性和介導(dǎo)突觸興奮性活動(dòng)等方面發(fā)揮著重要的作用。Glu的受體,特別是N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)在突觸可塑

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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10 張s，

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