本文關(guān)鍵詞：雙靶向調(diào)控CDX2基因慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定

  更多相關(guān)文章： 缺氧 端粒酶 慢病毒載體 基因治療 結(jié)直腸癌

【摘要】：目的構(gòu)建5個拷貝的HRE和hTERTp雙靶向調(diào)控表達(dá)CDX2基因的慢病毒表達(dá)載體,并在結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞中檢測其啟動活性。方法設(shè)計引物應(yīng)用PCR法從人結(jié)腸癌基因組中克隆獲得hTERT啟動子,用雙酶切和PCR法切除筆者所在課題組已構(gòu)建的載體pLEGFP-5HRE-CEAp中的CEA啟動子后,將hTERT啟動子與該載體重組,構(gòu)建出pLEGFP-5HRE-hTERTp;提取5HRE-hTERTp基因序列,同時雙酶切切除pLVX-EGFP-3FLAG載體中的CMV啟動子,同源重組構(gòu)建獲得pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG載體。設(shè)計引物應(yīng)用PCR法從筆者所在課題組已構(gòu)建的GV230-CDX2-EGFP載體中克隆獲得CDX2基因序列,用雙酶切和PCR法切除載體pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG中的EGFP后,將CDX2基因序列與該載體重組,構(gòu)建出pLVX-5HREhTERTp-CDX2-3FLAG。應(yīng)用pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG載體瞬時轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞,通過觀察綠色熒光蛋白EGFP的表達(dá),鑒定hTERTp的啟動活性。結(jié)果經(jīng)PCR和測序分析,pLEGFP-5HREhTERTp、pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG和pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG 3組質(zhì)粒與設(shè)計一致,測序正確。將pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG載體瞬時轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞,有綠色熒光表達(dá),提示hTERT啟動子能夠有效啟動下游基因的表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建了pLVX-5HRE-hTERTp-EGFP-3FLAG及pLVX-5HRE-hTERTp-CDX2-3FLAG載體,為后續(xù)的體外和體內(nèi)研究打下了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院普通外科;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院普通外科;陜西省人民醫(yī)院麻醉科;
【關(guān)鍵詞】： 缺氧 端粒酶 慢病毒載體 基因治療 結(jié)直腸癌
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(項目編號:81101874;項目編號:81172362) 陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計劃項目(項目編號:2011-K12-19) 陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計劃項目(項目編號:2013KTCQ03-08)~~
【分類號】：R346
【正文快照】： 結(jié)直腸癌是世界范圍內(nèi)的高發(fā)腫瘤,其死亡率在惡性腫瘤中排第3位[1-2]。在我國,結(jié)直腸癌為發(fā)病率第3高的惡性腫瘤,死亡率居第4位[3]。一直以來,以手術(shù)為主的綜合治療是結(jié)直腸癌治療的首要措施,近年來,隨著基因治療的發(fā)展,為結(jié)直腸癌的治療增添了新的方法[4-6],改善了預(yù)后,但與

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 范永衛(wèi);楊赤;萬玉良;王偉剛;陳素萍;;人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子介導(dǎo)的靶向性腫瘤基因治療的研究進(jìn)展[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2009年12期

2 李守帥;孫學(xué)軍;鄭見寶;任海亮;;尾型同源盒基因-2過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年01期

3 ;中國癌癥預(yù)防與控制規(guī)劃綱要(2004-2010)[J];中國腫瘤;2004年02期

4 鄭見寶;孫學(xué)軍;王煒;李守帥;任海亮;祿韶英;石景森;;HIF-1α與CDX2在結(jié)直腸腺癌組織中的表達(dá)及意義[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2010年12期

5 鄭見寶;孫學(xué)軍;王煒;祿韶英;任海亮;王偉;石景森;;缺氧下調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞株CDX2表達(dá)的研究[J];中國普通外科雜志;2010年04期

6 王宏芳;劉揚(yáng);李金華;吳嘉慧;李艷博;王志成;劉威武;龔守良;;雙重靶向條件復(fù)制型腺病毒的包裝及抗腫瘤作用[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年03期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張魯文;;惡性腫瘤防治臨床決策的循證醫(yī)學(xué)指導(dǎo)[J];重慶醫(yī)學(xué);2008年08期

2 陳坤;國人結(jié)直腸癌的病因?qū)W及綜合防治策略[J];國外醫(yī)學(xué).流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊;2005年04期

3 李瑋婷;張才成;李俊明;;小干擾RNA靶向系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年17期

4 王健;吳愛東;張紅雁;錢立庭;;前列腺癌調(diào)強(qiáng)適形放療的臨床療效和副反應(yīng)分析[J];安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報;2013年05期

5 白皓;韓寶惠;;手術(shù)在非小細(xì)胞肺癌單發(fā)腦轉(zhuǎn)移治療中的作用分析[J];中國肺癌雜志;2013年12期

6 何玉梅;邢影;常春娣;侯玲玲;;大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的克隆及原核重組表達(dá)載體的構(gòu)建[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2013年06期

7 許偉;位云艷;譚瑤曦;徐瑋;程雁;吳劍卿;;干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Sox2在肺癌中的表達(dá)和意義[J];中國肺癌雜志;2013年11期

8 白倩;謝琦;彭曉莉;常徽;朱俊東;糜漫天;;二氫楊梅素通過抑制甲基轉(zhuǎn)移酶誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞PTEN基因去甲基化[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2014年01期

9 孫多祥;周穎;胡衛(wèi)平;;上皮性卵巢癌生物學(xué)標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J];癌癥進(jìn)展;2013年06期

10 Hong Zheng;Jia-Yu Liu;Feng-Ju Song;Ke-Xin Chen;;Advances in circulating microRNAs as diagnostic and prognostic markers for ovarian cancer[J];Cancer Biology & Medicine;2013年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 李浴峰;高萍;夏芹;;健康管理在腫瘤防治中的應(yīng)用探討[A];第十三屆中國科協(xié)年會第18分會場-癌癥流行趨勢和防控策略研究研討會論文集（補(bǔ)充）[C];2011年

2 陳坤;金明娟;蔣沁婷;趙玉婉;馬新源;張揚(yáng);沈毅;裘炯良;姚開顏;李其龍;范春紅;宋亮;何寒青;;大腸癌環(huán)境暴露和代謝酶基因多態(tài)性的分子流行病學(xué)研究[A];浙江省第二十次腫瘤防治學(xué)術(shù)年會暨首屆浙江腫瘤學(xué)術(shù)周論文匯編[C];2006年

3 吳魏芹;張曉媛;徐海鳳;徐靜;沈捷;盧凱華;;肺癌細(xì)胞DAPK基因啟動子甲基化與Gefitinib敏感性的相關(guān)性研究[A];2013華東胸部腫瘤論壇暨第六屆浙江省胸部腫瘤論壇論文集[C];2013年

4 吳魏芹;盧凱華;張梅玲;金時代;;鹽酸�？颂婺嶂委�42例晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床觀察[A];2013華東胸部腫瘤論壇暨第六屆浙江省胸部腫瘤論壇論文集[C];2013年

5 ;Association between phospholipase C epsilon gene(PLCE1)polymorphism and colorectal cancer risk in a Chinese population[A];2013年浙江省肛腸外科學(xué)術(shù)年會暨結(jié)直腸疾病的微創(chuàng)及綜合治療新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王宏芳;CRAd.pEgr1-Smac聯(lián)合照射對MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞的抑制效應(yīng)[D];吉林大學(xué);2011年

2 王e，

本文編號：865331