發(fā)布時(shí)間：2017-09-01 21:55

  本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中AC基因亞型的表達(dá)及AC3對(duì)其纖毛長(zhǎng)度的影響

  更多相關(guān)文章： 腺苷酸環(huán)化酶 初級(jí)纖毛 纖毛長(zhǎng)度 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)

【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs),也稱骨髓基質(zhì)來(lái)源干細(xì)胞,是存在于骨髓中的一類具有多向分化潛能的干細(xì)胞,可分化為成骨細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等,參與體內(nèi)骨平衡調(diào)節(jié)和骨造血微環(huán)境構(gòu)成。腺苷酸環(huán)化酶(Adenylyl cyclase,AC)作為第二信使c AMP信號(hào)通路的重要組分,在BMSCs的成骨/成脂分化中具有重要作用,但BMSCs中AC亞型表達(dá)種類,尚待明了。初級(jí)纖毛(Primary cilia)是一種突出于真核細(xì)胞表面的“毛發(fā)狀”細(xì)胞器,是原生生物到脊椎動(dòng)物中一種在進(jìn)化上高度保守且必不可少的細(xì)胞器,具有感測(cè)和轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)械力和化學(xué)信號(hào)并產(chǎn)生信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)等功能,對(duì)BMSCs細(xì)胞增殖與分化具有關(guān)鍵作用。AC3不僅在哺乳動(dòng)物主要嗅覺(jué)表皮組織神經(jīng)細(xì)胞的初級(jí)纖毛介導(dǎo)的嗅覺(jué)信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中具有重要調(diào)節(jié)作用,還與BMSCs中的初級(jí)纖毛共表達(dá)。但AC3是否影響B(tài)MSCs中細(xì)胞纖毛長(zhǎng)度進(jìn)而影響B(tài)MSCs的增殖與分化,尚未明確。本研究通過(guò)對(duì)小鼠BMSCs原代培養(yǎng)條件優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)小鼠BMSCs原代培養(yǎng)在以4.0×106cell/m L的骨髓單核細(xì)胞濃度培養(yǎng),并于4d首次換液,增殖速度快,生長(zhǎng)狀態(tài)良好。對(duì)最適培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)良好的的細(xì)胞,提取其總RNA并反轉(zhuǎn)錄;采用RT-PCR和序列比對(duì)分析,確定了在原代小鼠BMSCs中有6種AC亞型表達(dá),分別為AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9;分別對(duì)野生型小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(WT-BMSCs)和AC3基因敲除型小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MUT-BMSCs)進(jìn)行體外培養(yǎng)、饑餓誘導(dǎo)和Li Cl刺激,利用細(xì)胞免疫熒光染色對(duì)初級(jí)纖毛進(jìn)行亞定位及長(zhǎng)度統(tǒng)計(jì)分析。相同體外培養(yǎng)條件下,相較于WT-BMSCs細(xì)胞,MUT-BMSCs細(xì)胞增殖速度相對(duì)較慢;同時(shí),體外誘導(dǎo)條件下,WT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長(zhǎng)度最長(zhǎng)為8.96μm,MUT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長(zhǎng)度最長(zhǎng)為5.61μm,MUT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長(zhǎng)度明顯短于WT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長(zhǎng)度。本研究明確了原代小鼠BMSCs中AC亞型表達(dá)種類分別為AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9,并首次發(fā)現(xiàn)小鼠AC3基因缺失可導(dǎo)致其BMSCs纖毛長(zhǎng)度變短。
【關(guān)鍵詞】：腺苷酸環(huán)化酶 初級(jí)纖毛 纖毛長(zhǎng)度 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 引言11-13
• 第1章 文獻(xiàn)綜述13-26
• 1．1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞13-17
• 1．1．1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞簡(jiǎn)介13-14
• 1．1．2 BMSCs的增殖與分化能力14-17
• 1．2 初級(jí)纖毛17-19
• 1．2．1 初級(jí)纖毛簡(jiǎn)介17-19
• 1．2．2 初級(jí)纖毛在骨形成中的作用19
• 1．3 腺苷酸環(huán)化酶19-24
• 1．3．1 腺苷酸環(huán)化酶簡(jiǎn)介19-21
• 1．3．2 AC的分類及特性21-23
• 1．3．3 AC3 簡(jiǎn)介23-24
• 1．4 本研究的目的和意義24-26
• 第2章 小鼠BMSCS中的AC基因家族表達(dá)26-34
• 2．1 前言26
• 2．2 試劑和溶液26-27
• 2．3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物27
• 2．4 方法27-30
• 2．4．1 體外分離培養(yǎng)原代小鼠BMSCs27-28
• 2．4．2 細(xì)胞免疫熒光染色分析28
• 2．4．3 細(xì)胞總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄28
• 2．4．4 RT-PCR28-30
• 2．4．5 核苷酸序列分析30
• 2．5 結(jié)果30-32
• 2．5．1 體外原代培養(yǎng)小鼠BMSCs30
• 2．5．2 特異性抗體檢測(cè)原代小鼠BMSCs純度30-31
• 2．5．3 小鼠BMSCs中AC表達(dá)種類31-32
• 2．6 討論32-34
• 第3章 小鼠BMSCS中腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ對(duì)初級(jí)纖毛長(zhǎng)度的影響34-50
• 3．1 前言34
• 3．2 相關(guān)儀器、試劑及實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 3．2．1 部分相關(guān)溶液及配置34-35
• 3．2．2 實(shí)驗(yàn)材料35
• 3．3 實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 3．3．1 小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞中初級(jí)纖毛的誘導(dǎo)35
• 3．3．2 免疫熒光染色鑒定及測(cè)量纖毛長(zhǎng)度35
• 3．3．3 纖毛長(zhǎng)度統(tǒng)計(jì)及分析35-36
• 3．4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-48
• 3．4．1 AC3 對(duì)BMSCs細(xì)胞生長(zhǎng)的影響36
• 3．4．2 WT-BMSCs初級(jí)纖毛長(zhǎng)度體外誘導(dǎo)36-42
• 3．4．3 MUT-BMSCs初級(jí)纖毛長(zhǎng)度體外誘導(dǎo)42-47
• 3．4．4 AC3 對(duì)小鼠BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長(zhǎng)度的影響47-48
• 3．5 討論48-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-59
• 致謝59-60
• 讀研期間發(fā)表的論文60

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 史春夢(mèng);;間充質(zhì)干細(xì)胞表述中需要注意的幾個(gè)問(wèn)題[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年14期

2 吳清法,王立生,吳祖澤;間充質(zhì)干細(xì)胞的來(lái)源及臨床應(yīng)用[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2002年03期

3 鄭春梅,孫昭,曹瑩,孫琪云,馬麗,馬冠杰,姜學(xué)英,趙春華;胎兒肺臟來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定與損傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)生物工程雜志;2004年03期

4 余國(guó)建;間充質(zhì)干細(xì)胞分化成骨的研究[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè);2004年S1期

5 宮立眾,田小波,鐘永明,夏順中;間充質(zhì)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2004年11期

6 王蓓,汪維偉;間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2005年06期

7 陳莉娜;王穎;張艷艷;關(guān)偉軍;;間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年28期

8 ;科技動(dòng)態(tài)[J];大眾科技;2008年03期

9 王瑛;李寧麗;;間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)趨化因子及受體的相關(guān)生物學(xué)功能[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2008年02期

10 金明順;張毅;賈秀芬;周燕華;閆妍;劉慧雯;;小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)以及多潛能分化的研究[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2009年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳可;王丁;韓之波;朱德林;韓忠朝;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外發(fā)揮免疫活性的研究[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

2 金明順;張毅;賈秀芬;周燕華;閆妍;劉慧雯;;小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)以及多潛能分化的研究[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

3 李爭(zhēng)艷;劉楊;翟麗麗;楊迷玲;王立峰;;間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤發(fā)展過(guò)程中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

4 張彥;李尚珠;;間充質(zhì)干細(xì)胞在血管工程中的機(jī)制及應(yīng)用[A];2009全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合周圍血管疾病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2009年

5 石玉;戴\戎;;周期性拉應(yīng)力對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化影響的研究[A];第九屆全國(guó)生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

6 黎嬌;朱爭(zhēng)艷;杜智;駱瑩;王鵬;高英堂;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分泌物對(duì)肝細(xì)胞增殖和凋亡的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第30次學(xué)術(shù)年會(huì)暨生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 譚遠(yuǎn)超;Kevin;姜紅江;黃相杰;周紀(jì)平;;間充質(zhì)干細(xì)胞在骨傷疾病治療中的應(yīng)用[A];首屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合骨科微創(chuàng)學(xué)術(shù)交流會(huì)暨專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2011年

8 唐佩弦;;間充質(zhì)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用前景[A];第三屆全國(guó)血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2003年

9 戴育成;;間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性和應(yīng)用[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

10 胡琳莉;王昕榮;錢坤;李舟;楊薇;朱桂金;;小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞向子宮內(nèi)膜分化的實(shí)驗(yàn)研究[A];第一屆中華醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)、中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)生殖生物學(xué)分會(huì)聯(lián)合年會(huì)論文匯編[C];2007年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 滿學(xué)杰;天津?yàn)I海新區(qū)建最大間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)基地[N];新華每日電訊;2008年

2 滿學(xué)杰;津昂賽打造間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)基地[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

3 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院輸血科 李忠俊 整理 吳劉佳;間充質(zhì)干細(xì)胞研究又見(jiàn)新方法[N];健康報(bào);2013年

4 上海生科院 上海交大醫(yī)學(xué)院健康科學(xué)研究所 曹楷;間充質(zhì)干細(xì)胞：干細(xì)胞中的孫悟空[N];上�？萍紙�(bào);2014年

5 記者　陳建強(qiáng);首家間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)在津建成[N];光明日?qǐng)?bào);2006年

6 記者　馮國(guó)梧;細(xì)胞產(chǎn)品國(guó)家工程中心建設(shè)方案獲準(zhǔn)[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

7 實(shí)習(xí)生 劉霞;間充質(zhì)干細(xì)胞有望用于面部整形[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

8 本報(bào)記者 王新佳;我國(guó)“原始間充質(zhì)干細(xì)胞”注射液進(jìn)入臨床研究[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2005年

9 馮國(guó)梧;全球首個(gè)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)規(guī)�；\(yùn)營(yíng)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

10 劉瑩清;全球首個(gè)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞庫(kù)泰達(dá)規(guī)模運(yùn)營(yíng)[N];北方經(jīng)濟(jì)時(shí)報(bào);2008年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李雪;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

2 陳可;人臍帶來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

3 王靜;胎兒來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性以及間充質(zhì)干細(xì)胞在肝纖維化中治療機(jī)制的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

4 鞠洪斌;大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化比較的體外研究[D];中南大學(xué);2006年

5 馬sビ，

本文編號(hào)：774579