本文關(guān)鍵詞：人巨細(xì)胞病毒即刻早期基因功能研究

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【摘要】：目的探討人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)在體外增殖過程中即刻早期(immediately early,IE)基因的作用。方法設(shè)計(jì)并化學(xué)合成3條靶向IE基因外顯子序列的siRNA,應(yīng)用陽離子脂質(zhì)體法將干擾序列轉(zhuǎn)染入人胚肺成纖維(human embryonic lung fibroblast,HELF)細(xì)胞,用HCMV感染已轉(zhuǎn)染入siRNA的細(xì)胞,同時(shí)設(shè)置正常對(duì)照組、陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組和轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果,熒光定量PCR和瓊脂糖凝膠電泳方法檢測(cè)分析導(dǎo)入的siRNA對(duì)IE基因和GAPDH陽性對(duì)照基因的抑制效果以及早期(E)基因和晚期(L)基因的表達(dá)情況。結(jié)果 siRNA成功導(dǎo)入HELF細(xì)胞內(nèi),6孔板內(nèi)5μl脂質(zhì)體可導(dǎo)入的最佳siRNA量約為100pmol,陽性對(duì)照組GAPDH表達(dá)量較其他對(duì)照組有明顯的下降(P0.05),抑制率為70.8%;干擾組中3條siRNA對(duì)IE基因的表達(dá)均有抑制作用。IE基因表達(dá)下調(diào)后,E基因和L基因的表達(dá)較對(duì)照組也有明顯下降(P0.05)。結(jié)論在體外,靶向IE基因的siRNA能有效抑制IE基因的表達(dá)從而影響E基因和L基因的表達(dá),表明IE基因的有效表達(dá)是E基因和L基因表達(dá)的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 江蘇大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院;鎮(zhèn)江市第一人民醫(yī)院兒科;
【關(guān)鍵詞】： 人巨細(xì)胞病毒 即刻早期基因 干擾RNA 基因表達(dá)
【基金】：江蘇省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(BK 2008238)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是雙鏈DNA病毒,在人群中感染十分普遍,近年來已成為引起新生兒先天性疾病和畸形的重要因素之一,但其致病機(jī)制仍不甚明了[1~4]。HCMV基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)具有一定的時(shí)序性,按表達(dá)的先后順序可分為即刻早期(immediately early,IE)基因、

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本文編號(hào)：767326