本文關鍵詞：Rac1對L02肝細胞株上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化及增殖和凋亡的影響

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【摘要】：目的檢測Rac1在TGF-β1誘導的L02細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用,及其對細胞增殖和凋亡的影響。方法應用不同活性的Rac1質(zhì)粒pExRed-NLS Flag(空載體組)、pExRed-NLS Flag Rac1(野生型Rac1組)、pExRed-NLS Flag Rac1T17N(顯性負調(diào)控Rac1組)、pExRed-NLS Flag Rac1G12V(持續(xù)活化型Rac1組)瞬時轉(zhuǎn)染L02細胞,經(jīng)5 ng/ml TGF-β1處理細胞。采用免疫印跡法檢測融合蛋白Flag-Rac1表達,采用細胞免疫熒光及免疫印跡法檢測Ck8和Vimentin表達,采用細胞劃痕實驗及Transwell法檢測細胞遷移能力。使用不同濃度的Rac1特異性抑制劑NSC23766處理L02細胞,采用CCK-8法檢測細胞增殖,采用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡。結(jié)果四組質(zhì)粒均成功瞬時轉(zhuǎn)染到L02細胞中;與空載體組和野生型Rac1組比,持續(xù)活化型Rac1轉(zhuǎn)染細胞Vimentin蛋白表達水平顯著增高,CK8蛋白表達水平降低,細胞遷移能力增加;與空載體組和野生型Rac1組比,顯性負調(diào)控Rac1轉(zhuǎn)染細胞Vimentin蛋白表達水平降低,CK8蛋白表達水平增高,細胞遷移能力降低(P0.05);在NSC23766處理L02細胞后,細胞增殖被抑制,但各處理組細胞凋亡無明顯差異。結(jié)論 Rac1可促進TGF-β1誘導的L02肝細胞株上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和細胞增殖,但對細胞凋亡無明顯影響。
【作者單位】： 東南大學醫(yī)學院;南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院消化科;
【關鍵詞】： L細胞 Rac 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 增殖 凋亡
【基金】：江蘇省自然科學基金資助項目(BK2011094)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-to-mesenchymaltransition,EMT)是指具有極性的上皮細胞轉(zhuǎn)化成具有活動能力、能夠在細胞基質(zhì)間自由移動的間質(zhì)細胞,以上皮細胞極性的喪失和間質(zhì)特性的獲得為重要特征[1]。近年來,已有研究發(fā)現(xiàn)肝上皮細胞可通過EMT參與細胞外基質(zhì)的合成與分泌[2]。

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