本文關鍵詞：單層培養(yǎng)細胞總RNA兩種提取方法的比較

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【摘要】：目的探討單層培養(yǎng)細胞總RNA提取過程中先行細胞消化或離心富集對所提RNA質量是否產生影響。方法培養(yǎng)NGF誘導的PC12細胞,采用Trizol試劑提取RNA:離心組(A)先將貼壁生長細胞經胰酶消化、離心獲得細胞沉淀,加入1 ml Trizol進行RNA提取;直接組(B)將培養(yǎng)液棄盡后直接加入Trizol試劑(1 ml/10 cm2瓶壁)進行RNA提取;均采用瓊脂糖凝膠電泳分析RNA完整性,紫外分光光度儀測定RNA濃度和OD260/OD280比值。結果凝膠電泳結果顯示,直接組出現3條清晰的條帶(28S、18S和5S條帶),離心組在電泳末端5S區(qū)出現粗大的條帶。兩組OD260/OD28比值相似,約為1.6。直接組組間樣品間RNA濃度相差較大。結論采用離心法和直接法提取貼壁細胞總RNA,先行細胞離心富集增加了RNA降解機會,直接法提取的RNA質量較高,考慮對后續(xù)實驗的影響,直接法更優(yōu)于離心法。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院心血管外科;軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所;
【關鍵詞】： 單層培養(yǎng)細胞 RNA提取 離心法 直接法
【基金】：國家自然科學基金資助(81172620)
【分類號】：R346
【正文快照】： 0引言體外培養(yǎng)細胞的總RNA提取是開展多項現代分子生物學技術中的一項基本操作[1]。單層培養(yǎng)細胞總RNA提取過程中的首要步驟存在兩種截然不同的操作方式:一種是先將細胞消化離心富集后再進行細胞裂解提取,僅需少量裂解液[2-3];另一種是將裂解液直接作用于貼壁生長細胞,但試劑

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