本文關(guān)鍵詞：Neurexin Ⅱ基因在大鼠及不同胎齡大鼠胚胎腸神經(jīng)系統(tǒng)的表達及意義

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【摘要】：目的：腸神經(jīng)系統(tǒng)(Enteric nervous system, ENS)是由分布于消化道管壁內(nèi)的神經(jīng)元及神經(jīng)纖維組成的內(nèi)在神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),接受中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system, CNS)的調(diào)節(jié),但相對獨立的調(diào)節(jié)胃腸道的運動、消化等各項功能。ENS由神經(jīng)嵴細胞發(fā)育形成,多種基因在其發(fā)育形成過程中發(fā)揮重要作用,如RET基因、SOX10基因、GDNE基因等。腸神經(jīng)元發(fā)育異常性疾病(Neuronal intestinal malformations, NIM)是一類常見且嚴重危害患兒健康水平的消化道畸形,以消化管壁神經(jīng)分布及功能異常為主要特征,是多種因素影響ENS發(fā)育,最終導致ENS神經(jīng)細胞在數(shù)量、質(zhì)量、分布及功能上異常的不同結(jié)局,其病因尚未完全闡明。NIM主要包括先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung's disease, HD)、腸神經(jīng)節(jié)細胞發(fā)育不良(Intestinal neuronal dysplasia, IND)、神經(jīng)節(jié)細胞減少癥(Hypoganglionosis, HG)、神經(jīng)節(jié)細胞未成熟(Immaturity of ganglion cells, IGC)、混合畸形及未分類的腸神經(jīng)發(fā)育不良。研究證實Neurexins在CNS中廣泛表達,且在功能性突觸的發(fā)生、分化、成熟及維持功能發(fā)面均發(fā)揮重要作用；我們在前期研究中發(fā)現(xiàn),Neurexins亦在ENS中廣泛表達,與胃腸動力紊亂性疾病如HD有密切關(guān)系,Neurexins、其配體Neuroligins及相關(guān)的神經(jīng)介質(zhì)谷氨酸與y-GABA異常是受累腸管蠕動功能障礙的重要原因。據(jù)此,實驗通過不同實驗方法對胎齡16天、18天、20天的大鼠胚胎及出生24小時內(nèi)的乳鼠(E16組、E18組、E20組、Ep0組)及部分成年大鼠結(jié)腸ENS中Neurexin Ⅱ基因的表達進行檢測,探討Neurexin Ⅱ基因與ENS發(fā)育的相關(guān)關(guān)系及Neurexin Ⅱ基因與NIM的可能關(guān)系。方法：對清潔級健康的Wistar雌性與雄性大鼠進行隨機配組,單獨交配使雌鼠受孕,受孕后在相同條件下單獨飼養(yǎng)至相應(yīng)孕齡,麻醉并處死孕齡16、18和20天孕鼠、出生24小時內(nèi)乳鼠,解剖獲取胚胎第16、18、20天和出生24小時內(nèi)及部分成年大鼠臨近回盲部、長度1.0cm左右的結(jié)腸全層組織標本。對成年大鼠結(jié)腸標本進行免疫組織化學DAB染色,觀察Neurexin Ⅱ α蛋白在ENS中的表達及表達部位;運用免疫組織化學DAB染色、Western blot及實時熒光定量PCR檢測胎齡16、18、20天大鼠胚胎和出生24小時內(nèi)乳鼠結(jié)腸標本中Neurexin Ⅱ α蛋白及Neurexin Ⅱ mRNA的表達。結(jié)果：免疫組織化學DAB染色結(jié)果顯示Neurexin Ⅱ α蛋白陽性染色成棕黃色或黃褐色,主要表達于ENS肌間神經(jīng)叢神經(jīng)節(jié)細胞,在黏膜下層及黏膜層亦有少量表達；其達量隨胚胎發(fā)育自胚胎第16天至出生后第一天逐漸增加。Western blot實驗顯示Neurexin Ⅱ α蛋白在E16、E18、E20和Ep0各組結(jié)腸全層組織提取總蛋白中的相對含量分別為0.054±0.009、0.106±0.020、0.215±0.013、0.280±0.030,隨胚胎發(fā)育Neurexin Ⅱα蛋白表達逐漸增加,組間比較與兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05),與免疫組化DAB染色結(jié)果所示趨勢一致。實時熒光定量PCR實驗結(jié)果顯示在E16、E18、E20和Ep0各組結(jié)腸標本中Neurexin Ⅱ mRNA相對表達依次為0.390±0.029、0.552±0.054、0.748±0.065、1.000±0.000,與其在蛋白水平的表達趨勢一致,組間比較與兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論：Neurexin Ⅱ基因表達于大鼠ENS中；伴隨胚胎發(fā)育ENS逐漸發(fā)育成熟過程中,其表達量逐漸增加,同ENS發(fā)育具有時間相關(guān)性；在ENS發(fā)育過程中,若Neurexin Ⅱ基因功能出現(xiàn)異�？赡軐е翹IM的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：腸神經(jīng)系統(tǒng) NeurexinⅡ 大鼠 基因表達
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R321
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號說明10-11
• 前言11-14
• 實驗材料和方法14-27
• 實驗結(jié)果27-30
• 討論30-40
• 結(jié)論40-41
• 附表及附圖41-47
• 參考文獻47-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文53-54
• 學位論文評閱及答辯情況表54

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本文編號：647531