本文關鍵詞：粉塵螨1類變應原T和B細胞表位t合基因的構建與表達

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【摘要】：目的構建粉塵螨1類變應原(Der f 1)的T和B細胞表位嵌合基因原核表達載體。方法將Der f 1包含的5個T細胞表位(T1~T5)和6個B細胞表位(B1~B6),以B1-T1-B2-T2-B3-T3-B4-T4-B5-T5-B6和B1-B2-B3-B4-B5-B6-T1-T2-T3-T4-T5連接方式直接合成表位嵌合基因,并分別命名為Der f 1A和Der f 1B。構建原核表達重組質粒pET-28a(+)-Der f 1A和pET-28a(+)-Der f 1B,雙酶切及測序驗證的陽性克隆轉化到E.coli BL21(DE3)后誘導表達。SDS-PAGE分析表達產物后進行純化,并進行Western blotting鑒定。ELISA法檢測嵌合蛋白對粉塵螨過敏患者血清IgE抗體的結合力。結果雙酶切及測序結果表明,成功構建了原核表達重組質粒pET-28a(+)-Der f 1A和pET-28a(+)-Der f 1B;SDS-PAGE分析表明,Der f 1A和Der f 1B誘導并純化成功,Western blotting結果進一步證實純化了Der f 1A和Der f 1B嵌合蛋白。與Der f 1相比,Der f 1A和Der f 1B嵌合蛋白與粉塵螨過敏患者血清IgE抗體的結合能力顯著降低(P均0.05),但Der f 1A和Der f 1B間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論成功表達了Der f 1的T和B細胞表位嵌合蛋白,為粉塵螨過敏的特異性免疫治療奠定了基礎。
【作者單位】： 安徽理工大學醫(yī)學院病原生物學教研室;
【關鍵詞】： 粉塵螨 粉塵螨類變應原 T細胞表位 B細胞表位 免疫印跡試驗
【基金】：國家自然科學基金(81270091、30872367) 安徽省自然科學基金(070413088)
【分類號】：R392
【正文快照】： 過敏性哮喘(哮喘)是臨床常見病和多發(fā)病,全世界約有3億人患有哮喘,其發(fā)病率和患病率呈逐年上升趨勢[1-3]。塵螨是引起哮喘最主要的氣傳性變應原之一[4-5],其中與人類變態(tài)反應性疾病聯(lián)系最緊密的主要是粉塵螨和屋塵螨。已報道的塵螨變應原已超過30種,其中最重要且研究較多的主，

本文編號：633165