本文關(guān)鍵詞：新型人工miRNA表達(dá)框架的構(gòu)建及其有效性驗(yàn)證

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【摘要】：目的構(gòu)建針對(duì)EGFP基因的人工miRNA表達(dá)框架并驗(yàn)證其有效性。方法用融合PCR技術(shù)在體外構(gòu)建針對(duì)EGFP基因的人工miRNA表達(dá)框架。經(jīng)測(cè)序比對(duì)后,以該表達(dá)框架與報(bào)告基因質(zhì)粒p EGFP-N2分別共轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞系Hep G2、人宮頸癌細(xì)胞系He La和人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549,48 h后用倒置熒光顯微鏡觀察增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)的表達(dá)情況并用流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)其抑制效率。結(jié)果構(gòu)建的人工miRNA表達(dá)框架經(jīng)測(cè)序比對(duì)正確;共轉(zhuǎn)染該表達(dá)框架和報(bào)告基因質(zhì)粒p EGFP-N2后,倒置熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示,3種細(xì)胞中發(fā)出熒光的細(xì)胞數(shù)量減少,熒光強(qiáng)度明顯降低。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,Hep G2細(xì)胞、He La細(xì)胞和A549細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染組和單獨(dú)轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞熒光表達(dá)率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t分別為20.80、30.35和20.34,P均0.01)。結(jié)論成功構(gòu)建靶向EGFP的人工miRNA表達(dá)框架,且此表達(dá)框架能有效而特異地抑制EGFP蛋白在Hep G2細(xì)胞、He La細(xì)胞和肺癌A549細(xì)胞中的表達(dá)。
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系;
【關(guān)鍵詞】： 人工miRNA表達(dá)框架 EGFP基因 Hep G細(xì)胞 He La細(xì)胞 A細(xì)胞
【基金】：中南大學(xué)本科生自由探索計(jì)劃項(xiàng)目(2282014bks193)
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 人工miRNA(artificial microRNA,amiRNA)技術(shù)以內(nèi)源miRNA前體(pre-miRNA)作為骨架,將pre-miRNA的正義鏈和反義鏈置換為設(shè)計(jì)好的序列后轉(zhuǎn)入動(dòng)植物中,利用miRNA的內(nèi)源性作用機(jī)制來抑制特定的靶基因[1]。與小干擾RNA(siRNA)相比,amiRNA具有較高的生物安全性和較低的毒副作用[2-3]

【參考文獻(xiàn)】

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3 趙海峰;李丹丹;李英;胡偉;王學(xué)軍;王升啟;;人工microRNA抗乙型肝炎病毒效果初探[J];生物技術(shù)通訊;2011年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 劉婷;王靜;汪俊軍;;脂質(zhì)相關(guān)miRNA研究進(jìn)展[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2014年07期

2 陳光輝;閆慧;孫長義;趙靜;;非小細(xì)胞肺癌患者癌組織和血漿中microRNA-21的表達(dá)及意義[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2014年09期

3 李英;謝佩雯;黃海;張秀娟;胡偉;王學(xué)軍;王升啟;;基于miRNA-155結(jié)構(gòu)的人工miRNA表達(dá)載體的構(gòu)建與評(píng)價(jià)[J];生物技術(shù)通訊;2012年06期

4 李英;胡偉;崔修亮;王學(xué)軍;王升啟;;人工microRNA技術(shù)研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2012年06期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李力群;高建華;潘盛盛;倪彬婷;;人高活性血管基質(zhì)層細(xì)胞快速分離及熒光標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2012年07期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 曾玉杰;馮義柏;于世龍;王勇;顏紅兵;李憲倫;柯元南;;缺血再灌注對(duì)心肌細(xì)胞間隙連接通訊影響的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì)第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2004年

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本文編號(hào)：623781