本文關(guān)鍵詞：不同階段泡沫細胞模型的建立與鑒定

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【摘要】：目的建立不同階段的泡沫細胞,并對其生物特性進行鑒定。方法體外培養(yǎng)人THP-1來源的巨噬細胞(THP-M),由ox-LDL誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)化為不同階段泡沫細胞,ELISA方法檢測不同階段泡沫細胞內(nèi)總膽固醇和膽固醇酯含量;透射電鏡和油紅O染色光鏡觀察細胞內(nèi)脂質(zhì),噻唑藍染色法測定不同階段泡沫細胞的活性變化規(guī)律。Western blot方法測定II型微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3II)蛋白表達水平。結(jié)果 24h開始,THP-M細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量的紅染顆粒或脂質(zhì)空泡,總膽固醇和膽固醇酯均較對照組增加,細胞膽固醇酯含量大于總膽固醇的50%,泡沫細胞已經(jīng)形成。噻唑藍染色結(jié)果顯示,自48h開始少量泡沫細胞出現(xiàn)死亡現(xiàn)象(存活率93.21±3.66%),60h和72h細胞存活率率分別為72.15±2.23%和63.06±1.83%。電鏡掃描結(jié)果發(fā)現(xiàn),24h細胞內(nèi)脂滴聚集,24h內(nèi)細胞漿自噬小體逐漸增多。36h、48h細胞內(nèi)脂滴大小和形態(tài)各異,可見吞噬脂滴后尚未消化完全的自噬溶酶體,部分細胞膜破裂;60h和72h,細胞內(nèi)自噬小體數(shù)量明顯減少,細胞大量崩解。Western blot檢測結(jié)果表明自噬標志性蛋白LC3II表達水平變化規(guī)律與電鏡觀察自噬小體結(jié)果一致。結(jié)論利用oxLDL誘導(dǎo)THP-M24h、36h-48h、60h-72h后,細胞形態(tài)和細胞內(nèi)脂含量分別符合早期、中期和晚期泡沫細胞的生物特征,成功建立了早、中、晚期泡沫細胞模型,其中細胞活力變化可能與II型凋亡(自噬性死亡)相關(guān)。為不同病程AS研究提供支持。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院國家心血管病中心阜外心血管病醫(yī)院心血管疾病國家重點實驗室北京市心血管植入材料臨床前評價重點實驗室動物實驗中心;
【關(guān)鍵詞】： 氧化型低密度脂蛋白 THP-細胞 泡沫細胞 動脈粥樣硬化
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(81200213)
【分類號】：R329
【正文快照】： 動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是貫穿心腦血管疾病的主線,是心肌梗死和腦卒中兩大主要心腦血管疾病的最根本原因。泡沫細胞在AS發(fā)生與發(fā)展中扮演重要角色[1-3]。建立穩(wěn)定可靠的泡沫細胞模型[4,5],對研究AS分子機制及篩選抗AS藥物有重要的意義。但總結(jié)多篇利用泡沫細胞模型

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本文編號：621010