發(fā)布時間：2017-08-03 12:15

  本文關鍵詞：人血清白蛋白特異性單域抗體的篩選鑒定、特性分析及應用

  更多相關文章： 人血清白蛋白 噬菌體展示技術(shù) 單域抗體 白蛋白檢測 親和去除法

【摘要】：人血清白蛋白是存在于人體內(nèi)的一種重要而常見的蛋白質(zhì),是疾病檢測與診斷的重要標記物之一。同時,關于如何去除血清中高豐度白蛋白以促進血漿蛋白質(zhì)組學分析和生物標記物的發(fā)現(xiàn),一直以來也備受人們的關注。因此,建立并發(fā)展一種有效而快速的白蛋白檢測方法,具有重要意義。同時,關于如何建立有效去除血清高豐度蛋白質(zhì)(白蛋白)的方法的問題也亟待解決,其對血清蛋白質(zhì)組學的深入研究至關重要。本研究旨在對駱駝免疫人血清白蛋白、建立免疫文庫的基礎上,借助課題組成熟的噬菌體展示平臺與技術(shù),篩選并經(jīng)PE-ELISA鑒定、測序、表達獲得人血清白蛋白特異的單域抗體；再對這些單域抗體進行一系列特性分析并試圖建立一套白蛋白檢測的方法,同時試圖利用NHS-活化珠子與單域抗體結(jié)合組裝親和柱、建立一套親和去除的方法。經(jīng)過努力,最終我們成功獲得了一個高質(zhì)量的噬菌體展示白蛋白單域抗體文庫,并獲得了四株特異針對人血清白蛋白的單域抗體。經(jīng)過一系列分析,這些單域抗體表現(xiàn)出純度好、產(chǎn)量高、特異性強、親和力高等良好的特性。對于白蛋白的檢測,我們成功建立了基于鏈霉親和素-生物素固相反應系統(tǒng)的定向雙單域抗體夾心檢測的方法,線性范圍10-1000 ng/mL、最低檢測限達到21.2 ng/mL,為建立科學完善的白蛋白檢測方法提供基礎。最后,我們成功建立了一套基于單域抗體的親和去除法,并成功地去除了血清中的高豐度蛋白(血清白蛋白),為血清蛋白質(zhì)組學以及血清中疾病標志物的發(fā)現(xiàn)提供實驗基礎。
【關鍵詞】：人血清白蛋白 噬菌體展示技術(shù) 單域抗體 白蛋白檢測 親和去除法
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-10
• 緒言10-12
• 第一章 文獻綜述12-21
• 1.1 人血清白蛋白的研究進展12-17
• 1.2 駝源單域抗體的研究進展17-21
• 第二章 噬菌體展示人白蛋白單域抗體文庫的構(gòu)建21-36
• 前言21
• 2.1 實驗材料和方法21-31
• 2.2 實驗結(jié)果31-33
• 2.3 結(jié)果討論33-36
• 第三章 人白蛋白單域抗體的篩選、表達及鑒定36-52
• 前言36
• 3.1 實驗材料和方法36-46
• 3.2 實驗結(jié)果46-50
• 3.3 結(jié)果討論50-52
• 第四章 定向雙抗夾心檢測方法的建立52-63
• 前言52
• 4.1 實驗材料和方法52-59
• 4.2 實驗結(jié)果59-61
• 4.3 結(jié)果討論61-63
• 第五章 親和去除法的建立63-72
• 前言63
• 5.1 實驗材料和方法63-67
• 5.2 實驗結(jié)果67-70
• 5.3 結(jié)果討論70-72
• 第六章 結(jié)論72-74
• 6.1 結(jié)論72
• 6.2 展望72-74
• 致謝74-75
• 參考文獻75-80
• 作者簡介80-81

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 蘆清霞;慶格樂圖;楊春靜;夏雪琴;李江偉;;駱駝重組SpaA-N單域抗體的制備與性質(zhì)研究[J];細胞與分子免疫學雜志;2012年01期

2 程巨龍,王祥斌,張眾,劉晶,姚新生,黃華梁;一種構(gòu)建改形單域抗體的方法(英文)[J];遺傳學報;2002年03期

3 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李英;尚伯楊;甄永蘇;;大鼠輕鏈單域抗體與力達霉素強化融合蛋白的構(gòu)建及其抗腫瘤作用[A];第四屆中國腫瘤大會中國藥理學會腫瘤藥理專業(yè)委員會分會場學術(shù)會議論文摘要[C];2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 馬歡;分別篩選與分析抗VEGF和EGFR的人重鏈單域抗體[D];暨南大學;2016年

2 李英;大鼠抗肝癌單域抗體與力達霉素強化融合蛋白的構(gòu)建及其抗腫瘤活性研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2005年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 劉超;人工設計駱駝源單域抗體庫構(gòu)建及雌二醇抗體篩選[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2016年

2 張偉雄;靶向上皮細胞粘附分子單域抗體的篩選及其表達純化[D];暨南大學;2016年

3 蘆婷;雙峰駝天然單域抗體庫的構(gòu)建及重鏈抗體特異性多抗的制備[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2016年

4 阿米娜;抗犬瘟熱病毒單域抗體庫的構(gòu)建與犬瘟熱基因原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學;2016年

5 李敏;人血清白蛋白特異性單域抗體的篩選鑒定、特性分析及應用[D];東南大學;2016年

6 余芳;RP215-VH單域抗體構(gòu)建表達及活性研究[D];重慶醫(yī)科大學;2014年

，

本文編號：614331