發(fā)布時(shí)間：2017-08-02 19:34

  本文關(guān)鍵詞：牛血清中牛病毒直接免疫熒光檢測(cè)方法的建立及驗(yàn)證

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【摘要】：目的建立牛血清中牛病毒直接免疫熒光檢測(cè)方法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法建立直接免疫熒光法檢測(cè)牛血清中牛病毒,對(duì)細(xì)胞接種濃度和血清濃度、病毒接種量、熒光抗體濃度、染色溫度及時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化;對(duì)優(yōu)化的方法進(jìn)行重復(fù)性、特異性、靈敏度驗(yàn)證,并與細(xì)胞培養(yǎng)法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果優(yōu)化的試驗(yàn)條件為:Vero和BT細(xì)胞的接種濃度分別為0.5×105和1.0×105個(gè)/ml,血清濃度為5%,病毒接種量為100~300 CCID50,熒光抗體1∶10稀釋,4℃染色12 h以上,但不超過(guò)24 h。2名實(shí)驗(yàn)人員按建立的方對(duì)3批牛血清分別進(jìn)行3次檢測(cè),均未檢出6種牛病毒;每種病毒僅在相應(yīng)抗體進(jìn)行染色時(shí)出現(xiàn)熒光;該方法檢測(cè)6種牛病毒的靈敏度較高。分別采用細(xì)胞培養(yǎng)法和直接免疫熒光法檢測(cè)15批新生牛血清和5批胎牛血清,結(jié)果均未檢出牛病毒。結(jié)論建立的牛血清中牛病毒直接免疫熒光檢測(cè)方法重復(fù)性好,特異性強(qiáng),靈敏度高,操作簡(jiǎn)便,與細(xì)胞培養(yǎng)法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)差異,可應(yīng)用于牛血清中牛病毒的檢測(cè)。
【作者單位】： 四川大學(xué)生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;成都生物制品研究所有限責(zé)任公司;
【關(guān)鍵詞】： 牛血清 牛病毒 直接免疫熒光法
【分類(lèi)號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 生物制品,尤其是病毒性疫苗大多都是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)制備。雖然近年來(lái)無(wú)血清培養(yǎng)基正在擴(kuò)大使用,并證明是可行的,但需要復(fù)雜的設(shè)備,且僅限于特殊的細(xì)胞類(lèi)型[1],因此,仍需采用添加牛血清的培養(yǎng)基生產(chǎn)生物制品[2]。在培養(yǎng)系統(tǒng)中加入適量血清可補(bǔ)充細(xì)胞生長(zhǎng)所需的生長(zhǎng)因子、激素、貼

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本文編號(hào)：610907