本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌Zmp1基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌鋅離子依賴的金屬蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)。方法以卡介苗(BCG)基因組DNA為模板,采用PCR法擴(kuò)增Zmp1基因;定向克隆到原核表達(dá)載體pET-32a(+)的多克隆位點(diǎn)中,構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32a(+)-Zmp1;轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE和Western blot法鑒定。結(jié)果PCR法擴(kuò)增出Zmp1基因;重組表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)雙酶切及基因測(cè)序鑒定構(gòu)建正確;表達(dá)的重組Zmp1融合蛋白相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約為94 000,大小與預(yù)期融合蛋白一致;重組Zmp1融合蛋白可與His標(biāo)簽單克隆抗體特異性結(jié)合。結(jié)論成功構(gòu)建了Zmp1基因原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌BL21(DE3)中獲得重組Zmp1融合蛋白表達(dá)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 Zmp 原核表達(dá)
【基金】：重慶市自然科學(xué)基金(cstc2012jjA10023) 國(guó)家自然科學(xué)基金(30771922,30901280)
【分類號(hào)】：R378.911
【正文快照】： 由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的結(jié)核病(tuberculosis,TB)是嚴(yán)重危害人類健康的慢性傳染病,全球有近1/3人口感染了結(jié)核菌,每年新發(fā)結(jié)核病例約870萬(wàn)例,每年死于結(jié)核病的人數(shù)高達(dá)200萬(wàn)[1]。結(jié)核病至今仍未取得有效控制,除與卡介苗(Bacillus Calmette-

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本文編號(hào)：517806