發(fā)布時間：2017-06-27 04:08

  本文關鍵詞：KCNJ11基因E23K基因多態(tài)對細胞膜電流的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:KCNJ11基因E23K多態(tài)與心血管疾病、糖尿病等相關聯(lián),本實驗通過研究人KCNJ11基因外顯子處E23K多態(tài)對細胞膜電流密度的影響,探討其與相關疾病關聯(lián)的機制。方法:普通PCR法擴增KCNJ11基因外顯子,重疊延伸PCR法使多態(tài)位點G※A突變,基因重組法將KCNJ11基因外顯子(分別含23E和23K等位基因)插入pcDNA3.1/CT-GFP真核表達載體,脂質體轉染法分別將重組質粒pcDNA3.1-KCNJ11(E)和pcDNA3.1-KCNJ11(K)轉入HEK293T細胞。采用全細胞膜片鉗技術,檢測轉染不同質粒的細胞膜電流密度。結果:PCR擴增獲得長度為1 173 bp的KCNJ11基因外顯子,成功構建pcDNA3.1-KCNJ11(E)和pcDNA3.1-KCNJ11(K)重組表達載體。全細胞膜片鉗檢測結果顯示,兩組轉染不同質粒的HEK293T細胞表面均檢測到正電流和負電流,細胞表面翻轉電壓均為50mV。兩組細胞相比,轉染pcDNA3.1-KCNJ11(E)質粒的細胞表面電流明顯高于轉染pcDNA3.1-KCNJ11(K)質粒的細胞(P0.05,n=10)。結論:KCNJ11基因外顯子E23K多態(tài)能導致細胞膜電流發(fā)生改變,為進一步研究多態(tài)位點與相關疾病的關聯(lián)機制提供實驗基礎。
【作者單位】： 蘭州城市學院;蘭州大學第一醫(yī)院;北京體育大學;
【關鍵詞】： KCNJ 基因多態(tài)性 膜片鉗 細胞膜電流
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31071032)
【分類號】：R363.1
【正文快照】： KCNJ11基因編碼內向整流型鉀離子通道蛋白Kir6.2,主要存在于心肌、骨骼肌、胰腺β-細胞、腦神經元等處[1,2]。細胞內ATP/ADP的變化、4,5-二磷酸肌醇以及長鏈乙酰輔酶A均能激活該通道。在運動過程中,能合理調節(jié)心臟對外界應急反應的適應能力,被認為是心臟的能量感受器。KCNJ11

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