c-Myc對誘導性多能干細胞的誘導效率及全能性影響的研究
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【摘要】:該研究探討轉錄因子c-Myc對多能誘導干細胞(induced pluripotent stem cells,iPS)誘導效率及形成的iPS克隆全能性的影響。將Yamanaka四因子(Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc,OSKM)和不含c-Myc的三因子(OSK)病毒分別感染OG2小鼠成纖維細胞(mouse embryo fi broblast,MEF),誘導成為iPS細胞,通過計數(shù)iPS克隆形成數(shù)目和流式細胞儀分析iPS克隆的綠色熒光蛋白(GFP)陽性比例,比較OSKM和OSK誘導iPS的效率。分別挑取三株OSK和OSKM誘導的iPS克隆,采用熒光定量PCR法、堿性磷酸酶(AP)染色法和免疫熒光法檢測iPS克隆的干性相關蛋白的表達;采用畸胎瘤實驗、嵌合體形成實驗和四倍體補償實驗檢測iPS克隆的全能性。結果顯示:在該實驗室誘導體系里,OSK病毒感染MEF后形成的iPS克隆數(shù)目明顯增多,GFP陽性克隆的比例增加。OSK和OSKM誘導iPS克隆的干細胞基本特征,包括形態(tài)、AP染色、干細胞特異性基因表達、三胚層形成均沒有明顯差異。然而,OSK誘導iPS克隆在形成嵌合體小鼠的全能性評估實驗中的陽性比例高于OSKM克隆,且只有OSK克隆株能夠獲得生殖系傳遞小鼠和四倍體補償小鼠。該研究表明,在實驗誘導體系里去除c-Myc的三因子OSK誘導iPS的效率顯著高于OSKM四因子,且三因子誘導iPS克隆具有更好的全能性。
【作者單位】: 上海市信號轉導與疾病研究重點實驗室 同濟大學生命科學與技術學院;
【關鍵詞】: 誘導多能干細胞 c-Myc 嵌合體小鼠 四倍體補償小鼠
【基金】:國家自然科學基金(批準號:31071227)資助的課題~~
【分類號】:R329.2
【正文快照】: 誘導多能干細胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)和胚胎干細胞同樣具有無限增殖和自我更新的能力,但iPS細胞避免了胚胎干細胞存在的倫理等諸多問題,因此是再生醫(yī)學研究的重大突破。自2006年Yamanaka小組[1]通過共表達Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc四種轉錄因子(OSKM)成
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