本文關(guān)鍵詞：HSV-1衣被蛋白UL7基因的克隆及其在病毒增殖中的表達分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：單純皰疹病毒(Herpes simplex virus, HSV)是一種危害人類健康的常見病原體,分為HSV-1和HSV-2兩種血清型。病毒通過受損皮膚或黏膜感染宿主細胞,在宿主的上皮組織內(nèi)生長增殖,另一方面,病毒也能進一步從感染的上皮組織的神經(jīng)末梢入侵到神經(jīng)元,在初次感染后于三叉神經(jīng)節(jié)、背根神經(jīng)節(jié)等處建立潛伏性感染,并伴隨宿主終生。其中,單純皰疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus Ⅰ, HSV-1)可引起人皮膚、黏膜和神經(jīng)系統(tǒng)感染,能導(dǎo)致角膜炎、皰疹性腦炎、唇皰疹和齦口炎等疾病。衣被蛋白(也稱間層蛋白,tegument protein)在成熟的皰疹病毒顆粒中既以結(jié)構(gòu)蛋白的形式存在,又在病毒的增殖過程中發(fā)揮著特定的生物學(xué)作用。UL7是HSV-1型皰疹病毒衣被蛋白的編碼基因之一,目前國內(nèi)外對其編碼的蛋白進行的研究還不夠深入,文獻中都報道較少。但是有研究證實,UL7編碼基因在皰疹病毒間是高度保守的,作為HSV-1 UL7基因的同源基因,牛皰疹病毒1型(Bovine herpes virus 1, BHV-1)和偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)的UL7突變株在細胞中的復(fù)制能力受損,只是對其具體機制還不是很了解。同時也有實驗表明,HSV-1型皰疹病毒的UL7與UL51通過相互作用,參與病毒感染細胞的過程�；趯L7蛋白的初步了解,為了更加系統(tǒng)地研究UL7蛋白在HSV-1型皰疹病毒增殖過程中的功能意義,本課題做了以下工作：提取了HSV-1的基因組,并用PCR方法擴增了UL7基因片段,構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pGEX-5X-1-UL7,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達,獲得并純化GST-UL7重組蛋白,將其作為抗原免疫ICR小鼠制備抗UL7多克隆抗體。用間接法ELISA檢測抗體的效價,Western Blot檢測抗體的特異性,并使用該多克隆抗體對HSV-1病毒感染Vero細胞后的各時間點UL7蛋白表達量進行檢測。實驗結(jié)果表明,GST-UL7重組蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中高效表達,間接法ELISA檢測抗UL7抗體效價可達1：163840以上。Western Blot實驗證明抗UL7多克隆抗體可以特異性識別UL7蛋白。在HSV-1病毒感染Vero細胞后的各時間點均檢測到UL7蛋白的表達。通過成功獲得GST-UL7融合蛋白,并制備了抗UL7蛋白的多克隆抗體,利用該抗體我們初步確定了UL7蛋白在HSV-1增殖過程中呈持續(xù)性表達。
【關(guān)鍵詞】：單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-1) UL7 衣被蛋白 原核表達 多克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-15
• 1 皰疹病毒的基本生物學(xué)特征7-8
• 2 HSV-1的感染與臨床癥狀8-11
• 3 HSV-1的治療11
• 4 HSV-1病毒的基因結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)性狀11-12
• 5 HSV-1的衣被蛋白12-15
• 實驗材料與方法15-37
• 1 實驗材料15-18
• 2 實驗方法18-37
• 實驗結(jié)果與分析37-43
• 1 HSV-18F株的基本特性37
• 2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建37-38
• 3 UL7蛋白在原核細胞中的表達與純化38-41
• 4 抗UL7蛋白多克隆抗體的制備及特異性鑒定41
• 5 核質(zhì)分離效果的鑒定41-42
• 6 抗UL7蛋白抗體應(yīng)用于HSV-1病毒中UL7蛋白的檢測42-43
• 討論43-46
• 小結(jié)46-47
• 參考文獻47-51
• 附錄51-61
• 附錄1 主要縮略詞表51-52
• 附錄2 論文所用序列52-53
• 附錄3 主要溶液配制表53-57
• 附錄4 測序峰形圖57-59
• 附錄5 蛋白質(zhì)譜鑒定結(jié)果59-61
• 致謝61-62
• 研究生簡歷62-63

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