本文關鍵詞：pEGFP-C2-NLRC5重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建含NLRC5蛋白功能區(qū)的cDNA序列的真核表達載體pEGFP-C2-NLRC5,并檢測其在腎成纖維細胞(COS-7)中的表達。方法采用RT-PCR法從人肝星狀細胞(LX-2)中獲得NLRC5蛋白功能區(qū)的cDNA序列片段,用EcoRⅠ和BamHⅠ雙切酶將片段和載體pEGFP-C2雙酶切后,酶切產(chǎn)物加入T4連接酶16℃連接過夜,構(gòu)建真核表達載體pEGFP-C2-NLRC5。將構(gòu)建成功的pEGFP-C2-NLRC5重組質(zhì)粒經(jīng)PCR,限制性內(nèi)切酶酶切和測序鑒定后用陽離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將其轉(zhuǎn)染至COS-7細胞,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白表達,Western blot法鑒定融合蛋白表達。結(jié)果陽性克隆經(jīng)雙酶切法鑒定可見NLRC5基因片段。轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后可觀察到綠色熒光蛋白的表達,而且主要分布在細胞質(zhì)中,Western blot法也可檢測到在74 ku處有一明顯條帶,其大小符合EGFP-NLRC5表達的蛋白(NLRC5蛋白大小約為47 ku,EGFP蛋白大小約為27 ku),表明融合蛋白可在哺乳動物細胞中成功表達。結(jié)論成功構(gòu)建pEGFP-C2-NLRC5質(zhì)粒,NLRC5蛋白可在COS-7細胞中成功表達。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學藥學院;
【關鍵詞】： NLRC COS- 基因表達 重組質(zhì)粒 轉(zhuǎn)染
【基金】：國家自然科學基金(編號:81273526) 安徽省自然科學基金(編號:KJ2010A178)
【分類號】：R346
【正文快照】： 天然免疫系統(tǒng)中的核苷酸結(jié)合寡聚結(jié)構(gòu)域樣受體NOD樣受體(NOD-like receptor,NLR)家族成員之一——NLR家族含CARD結(jié)構(gòu)域5(NOD-like re-ceptor family CARD domain containing 5,NLRC5)蛋白分子,參與了對先天免疫核因子-κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)信號通路中一種非常重

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄧超;黃大f ;宋福平;;綠色熒光蛋白及其應用[J];中國生物工程雜志;2011年01期

2 朱夢瑜;高星杰;錢寶鑫;葛林;趙虹;趙秀娟;楊潔;;重組真核質(zhì)粒pEGFP-C2-hG3BP-Domain(1～5)的構(gòu)建及表達[J];天津醫(yī)藥;2011年11期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 白冰珂;陶玲;沈宏輝;侯俊;胡燕;羅聲棟;楊銳創(chuàng);貌盼勇;;新型呼腸病毒M片段對核轉(zhuǎn)錄因子κB的活性抑制的研究[J];傳染病信息;2013年06期

2 王驍;李中堅;王小平;朱京科;余青霓;張興旺;雷樂成;;電場與放電殺菌技術應用于飲用水安全消毒的研究[J];環(huán)境科學學報;2013年03期

3 王欲曉;莊文昌;王靖;;一株微生物采油菌的16S rDNA鑒定和綠色熒光蛋白分子標記[J];徐州工程學院學報(自然科學版);2011年04期

4 趙寧;鄧新燕;單于;郭中敏;;攜帶EGFP與rtTA雙基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及其在PA317細胞中的表達[J];熱帶醫(yī)學雜志;2012年12期

5 李麗s

本文編號：454604