發(fā)布時(shí)間：2017-06-08 09:04

  本文關(guān)鍵詞：內(nèi)向整流鉀通道Kir4.1在少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育及髓鞘形成中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：少突膠質(zhì)細(xì)胞(Oligodendrocyte,OL)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system,CNS)的髓鞘形成細(xì)胞,對(duì)于髓鞘的形成以及神經(jīng)信息的傳遞有著非常重要的作用。少突膠質(zhì)細(xì)胞由少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(Oligodendrocyte precursor cell,OPC)分化而來(lái)。長(zhǎng)期研究明確地表明,OL發(fā)育異常、脫髓鞘或髓鞘再生障礙參與了CNS多種疾病的形成,其中包括多發(fā)性硬化癥(Multiple sclerosis,MS),視神經(jīng)炎,肌萎縮側(cè)索硬化,精神分裂癥,抑郁癥等精神疾病的病理生理過(guò)程。有最新研究顯示內(nèi)向整流鉀離子通道4.1(Inwardly rectifying K channel 4.1,Kir4.1)在MS病人的病灶區(qū)表達(dá)異常,Kir4.1通道廣泛分布在各種組織,因?yàn)樵撏ǖ离妷号c電流的關(guān)系具有內(nèi)向整流特性而得名。Kir4.1通道對(duì)調(diào)節(jié)神經(jīng)的興奮性、電解質(zhì)的平衡和維持正常神經(jīng)功能具有極為重要的作用,但其是否參與髓鞘化異�；蛘呙撍枨始膊∪圆磺宄Ｉ偻荒z質(zhì)細(xì)胞由少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(Oligodendrocyte precursor cell,OPC)分化而來(lái)。目前關(guān)于Kir4.1在OL發(fā)育以及髓鞘形成中的作用還未見報(bào)道。目前我們的研究旨在Kir4.1是否參與CNS髓鞘發(fā)育。我們的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,Kir4.1在體外培養(yǎng)的OPC和OL中均有表達(dá),在誘導(dǎo)OPC分化為OL后,Kir4.1表達(dá)水平顯著增高。加入Kir4.1特異性阻斷劑地西帕明(Desipramine,DES)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中髓鞘相關(guān)蛋白(Myelin basic protein,MBP)信號(hào)明顯減弱,MBP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照,證實(shí)阻斷Kir4.1功能會(huì)導(dǎo)致體外OPC分化受阻。同時(shí),在少突膠質(zhì)細(xì)胞系特異敲除Kir4.1通道的小鼠中發(fā)現(xiàn)胼胝體和視神經(jīng)髓鞘發(fā)育異常,胼胝體OL細(xì)胞減少,海馬組織和皮層組織MBP表達(dá)量降低。這說(shuō)明在少突膠質(zhì)細(xì)胞系中敲除Kir4.1會(huì)導(dǎo)致OL發(fā)育受阻和CNS髓鞘缺陷。這些結(jié)果提示向整流鉀通道kir4.1在ol發(fā)育及髓鞘形成中發(fā)揮重要作用。研究目的:明確內(nèi)向整流鉀通道kir4.1是否在少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育及髓鞘形成中發(fā)揮作用。研究方法:1.利用westernblot和細(xì)胞免疫組化檢測(cè)opc分化的不同階段,kir4.1及髓鞘相關(guān)蛋白mbp的表達(dá)情況。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,gapdh)為內(nèi)參,聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction,pcr)方法檢測(cè)kir4.1及mbp的mrna表達(dá)。2.利用kir4.1的特異性阻斷劑desipramine在opc分化的不同階段阻斷kir4.1通道96h后,westernblot檢測(cè)髓鞘相關(guān)蛋白mbp的表達(dá)情況。細(xì)胞免疫染色方法檢測(cè)加入des后,mbp、少突膠質(zhì)細(xì)胞系的標(biāo)記蛋白o(hù)lig2(oligodendrocytetranscriptionfactor2)、增殖細(xì)胞相關(guān)核抗原ki67和血小板源性生長(zhǎng)因子α受體(α-receptorforplatelet-derivedgrowthfactor,pdgfrα)的表達(dá)情況。3.利用kir4.1f/f小鼠與少突膠質(zhì)細(xì)胞系特異性表達(dá)olig1的cre小鼠雜交,構(gòu)建在少突膠質(zhì)細(xì)胞系中特異敲除kir4.1通道的遺傳修飾小鼠品系olig1-cre。利用依來(lái)鉻氰r染色法和電鏡技術(shù)檢測(cè)視神經(jīng)髓鞘的形態(tài)學(xué)變化,利用confocal顯微鏡觀察kir4.1敲除對(duì)ol細(xì)胞發(fā)育的影響。利用westernblot技術(shù)檢測(cè)kir4.1敲除小鼠海馬、大腦皮層以及脊髓中mbp的表達(dá)狀況。主要結(jié)果:1.在體外培養(yǎng)的ol細(xì)胞中kir4.1通道蛋白和信使核糖核酸(messengerrna,mrna)的表達(dá)量較opc增加,ol細(xì)胞中mbp蛋白和mrna的表達(dá)量較opc也明顯增加。2.體外培養(yǎng)的opc細(xì)胞中加入des后,mbp表達(dá)量明顯下降,ki67和pdgfrα表達(dá)量明顯增加。3.依來(lái)鉻氰R染色和電鏡觀察顯示Kir4.1敲除的小鼠視神經(jīng)髓鞘發(fā)育異常,免疫熒光染色顯示Kir4.1敲除的小鼠中Olig2、成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物(adenomatous polyposis coli(APC)tumor suppressor protein,CC-1)表達(dá)量下降。Western blot顯示Kir4.1敲除小鼠海馬和大腦皮層中MBP表達(dá)量明顯下降,脊髓中MBP表達(dá)量無(wú)明顯變化。結(jié)論:1.內(nèi)向整流鉀通道Kir4.1在少突膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用;2.阻斷內(nèi)向整流鉀通道Kir4.1會(huì)抑制少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的分化;3.內(nèi)向整流鉀通道Kir4.1的功能異常會(huì)影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘形成。
【關(guān)鍵詞】：向整流鉀離子通道4.1 少突膠質(zhì)細(xì)胞 少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞 髓鞘
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R338
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫詞表10-13
• 前言13-18
• 材料與方法18-35
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-46
• 討論46-49
• 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 文獻(xiàn)綜述53-62
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 致謝62-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷65

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