發(fā)布時間：2017-05-26 03:05

  本文關(guān)鍵詞：抗體純化工藝中蛋白與配基相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：針對治療型單克隆抗體純化工藝中的關(guān)鍵問題,本論文利用表面等離子體共振(SPR)技術(shù)研究了疏水電荷誘導層析(HCIC)配基與抗體蛋白質(zhì)的相互作用,對于表面和溶液的多種因素對相互作用的影響進行了考察。采用自組裝技術(shù)在金襯底上構(gòu)建了兩種不同密度的HCIC配基表面模型。分別利用X射線光電子能譜(XPS)、X射線吸收精細結(jié)構(gòu)(NEXAFS)、接觸角和表面等離子體共振(SPR)對表面化學與結(jié)構(gòu)、離子化和蛋白質(zhì)結(jié)合進行了考察。采用SPR技術(shù)系統(tǒng)研究配基密度和溶液因素(如鹽濃度、pH值)對抗體和白蛋白吸附的影響。我們的實驗結(jié)果表明,配基密度對相互作用的熱力學和動力學都有影響。值得注意的是,高配基密度能夠提高結(jié)合強度,增大吸附速率,降低解離速率并會導致特異性降低。在中性條件下,疏水作用和氫鍵作用都對蛋白質(zhì)吸附有很大的貢獻,而在酸性條件下則會被靜電排斥力超過。此外,本論文通過利用配基對鐵磁性納米顆粒進行修飾構(gòu)建了新穎的抗體蛋白分離體系,該體系易于小量、快速分離抗體,對抗體具有一定的特異性吸附能力。以上抗體-配體相互作用的研究將有力支撐和推動單克隆抗體分離純化工藝的優(yōu)化。
【關(guān)鍵詞】：疏水電荷誘導層析 表面等離子體共振 抗體 配基密度 相互作用
【學位授予單位】：大連理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392;Q51
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 緒論11-22
• 1.1 抗體11-12
• 1.1.1 抗體的結(jié)構(gòu)11
• 1.1.2 單克隆抗體藥物的發(fā)展11-12
• 1.2 抗體的分離純化方法12-15
• 1.2.1 親和層析12-13
• 1.2.2 離子交換層析13-14
• 1.2.3 疏水相互作用層析14
• 1.2.4 羥基磷灰石層析14-15
• 1.3 疏水性電荷誘導層析原理與應(yīng)用15-17
• 1.3.1 原理15
• 1.3.2 應(yīng)用和工藝優(yōu)化15-16
• 1.3.3 疏水性電荷誘導層析的機理研究16-17
• 1.4 本論文應(yīng)用的研究工具17-21
• 1.4.1 生物傳感器18-20
• 1.4.1.1 表面等離子體共振18-19
• 1.4.1.2 石英晶體微天平19-20
• 1.4.2 X射線光電子能譜20
• 1.4.3 自組裝單分子膜20-21
• 1.5 本論文研究內(nèi)容21-22
• 2 MEP自組裝表面的制備與表征22-34
• 2.1 引言22-23
• 2.2 實驗材料與儀器23-24
• 2.2.1 材料和試劑23
• 2.2.2 溶液配制方法23
• 2.2.3 主要儀器23-24
• 2.3 試驗方法24-26
• 2.3.1 金襯底的制備24
• 2.3.2 兩種MEP表面模型的制備24-26
• 2.3.2.1 DVS-MEP自組裝表面的制備25
• 2.3.2.2 MEP-only自組裝表面的制備25-26
• 2.3.3 接觸角測量26
• 2.3.4 X射線光電子能譜(XPS)26
• 2.3.5 X射線吸收精細結(jié)構(gòu)(NAXAFS)26
• 2.4 實驗結(jié)果與討論26-33
• 2.4.1 XPS和NEXAFS對MEP表面的表征26-32
• 2.4.2 接觸角對MEP表面的表征32-33
• 2.5 小結(jié)33-34
• 3 利用SPR對HCIC配基-抗體之間的相互作用的研究34-46
• 3.1 引言34
• 3.2 實驗材料與儀器34-35
• 3.2.1 材料和試劑34
• 3.2.2 溶液配制方法34
• 3.2.3 主要儀器34-35
• 3.3 試驗方法35-36
• 3.3.1 SPR光譜學35
• 3.3.2 吸附熱力學和動力學分析35-36
• 3.4 實驗結(jié)果與討論36-44
• 3.4.1 利用SPR蛋白吸附對MEP表面進行表征36-38
• 3.4.2 配基密度對相互作用的影響38-42
• 3.4.3 鹽濃度對相互作用的影響42-43
• 3.4.4 溶液pH對相互作用的影響43-44
• 3.5 小結(jié)44-46
• 4 基于鐵磁性納米顆粒的抗體純化研究46-54
• 4.1 引言46
• 4.2 實驗材料與儀器46-48
• 4.2.1 材料和試劑46-47
• 4.2.2 溶液配制方法47-48
• 4.2.3 主要儀器48
• 4.3 試驗方法48-50
• 4.3.1 磁性納米顆粒的修飾48-49
• 4.3.2 外光譜分析49
• 4.3.3 抗體吸附實驗49
• 4.3.4 SDS-PAGE凝膠電泳49-50
• 4.4 實驗結(jié)果與分析50-53
• 4.4.1 紅外光譜表征50-51
• 4.4.2 抗體吸附實驗結(jié)果51-53
• 4.5 小結(jié)53-54
• 5 總結(jié)54-55
• 參考文獻55-63
• 附錄A 英文縮略詞釋義63-64
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表學術(shù)論文情況64-65
• 致謝65-66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 程慧,黃朝峰,段子淵;SPR生物傳感器及其應(yīng)用進展[J];中國生物工程雜志;2003年05期

  本文關(guān)鍵詞：抗體純化工藝中蛋白與配基相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：395595