有關人的胰腺導管上皮細胞的生理功能調節(jié)、受體分布、基因表達調控、癌變機制等方面的研究，仍是較為薄弱的領域，其中最重要的原因是分離培養(yǎng)以胰腺導管上皮細胞為主的細胞群十分困難，特別是體外長期培養(yǎng)的問題至今沒有解決�；诒绢I域研究工作的迫切需要，我們進行了這方面的工作。 首先，采用膠原酶消化的方法，分離人胚(中期引產(chǎn)的胎兒，20-30周)胰腺上皮細胞為細胞團，將10％FBS完全培基加入到這些細胞團中，接種至50ml塑料培養(yǎng)瓶，24小時后換2％FBS完全培基進行原代培養(yǎng)。經(jīng)過近20個胎兒的胰腺標本的分離培養(yǎng)，摸索出了適合于胰腺導管上皮細胞原代培養(yǎng)的方法和條件。若原代培養(yǎng)的細胞不傳代，其生活狀態(tài)可維持長達2月之久；也可以傳代，傳第3代的細胞仍以上皮細胞為主，細胞生長良好。 對原代培養(yǎng)細胞進行了初步的鑒定，結果為培養(yǎng)77、96小時的原代細胞，淀粉酶檢測陰性，Cytokeratin免疫細胞化學染色陽性，說明原代培養(yǎng)的細胞為導管上皮細胞而非腺泡細胞，為進行體外轉化奠定了基礎。 在成功地建立胰腺導管上皮細胞原代和傳代培養(yǎng)的基礎上，利用SV40 T基因摻入細胞基因組DNA后可以造成...

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖3.大量提取質粒psv一TDNA的鑒定

五、附圖令b令了矛了6.SKb一2.3kb圖3.大量提取質粒psv一TDNA的鑒定結果顯示提取的質粒DNA，與DNAn、arker比較，片段大小符合6.OKb;未經(jīng)酶切，經(jīng)BmaHl酶切、EC。咫酶切，其片段大小均與饋贈質粒DNA的片段大小相吻合.(Std:饋贈質粒DNA;PrP....

圖6.26周胎兒胰腺組織學(HE)

圖6.26周胎兒胰腺組織學(HE)a:小葉及導管40‘b:腺泡組織2

圖7.胰腺上皮細胞的原代培養(yǎng)培養(yǎng)36小時100培養(yǎng)70小時l()(j

圖7.胰腺上皮細胞的原代培養(yǎng)培養(yǎng)36小時100培養(yǎng)70小時l()(

圖8.胰腺上皮細胞的原代培養(yǎng)(l正)

圖8.胰腺上皮細胞的原代培養(yǎng)(l正)細胞團周圍生長的上皮細

本文編號：3936136