血管抑素(Angiostatin，AS)是血漿纖溶酶原(Plasminogen，PLG)經(jīng)蛋白水解酶降解生成的多肽片段，是直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成抑制劑。AS可以阻抑血管生成治療由病理性血管形成而導(dǎo)致的疾病，尤其是可通過抗腫瘤新生血管生成抑制腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移，有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究以高效、低毒、廣譜且無耐藥性產(chǎn)生的內(nèi)源性血管抑制因子AS為研究對象，構(gòu)建含AS基因的分泌型重組表達(dá)質(zhì)粒pEZZ18-AS，在E.coli DH5α內(nèi)表達(dá)并對其進(jìn)行鑒定。 本研究第一部分包括肝組織中總RNA的分離提��；RT-PCR擴(kuò)增出血管抑素基因。首先，采集術(shù)后新鮮肝組織，并于無RNase的條件下分離純化總RNA。其次，在其完整性及純度鑒定后做RT-PCR擴(kuò)增目的基因AS，分別在上下游引物引入限制性內(nèi)切酶EcoR I與Xba I的酶切位點(diǎn)及相對應(yīng)的保護(hù)堿基。本部分成功獲取AS(即Kringle 1-4區(qū)域)與PLG Kringle 1-5區(qū)(即K1-5)的基因片段。將K1-5 PCR產(chǎn)物測序，結(jié)果為：除測序引物后邊有一段不穩(wěn)定序列，其余序列均與Gene Bank里PLG cDNA中相應(yīng)核...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略語
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 由肝組織提取總RNA及RT-PCR
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 含血管抑素基因分泌型表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第三部分 重組人AS在大腸桿菌中的初步表達(dá)
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
致謝



本文編號：3927490