將結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)多個(gè)B細(xì)胞預(yù)測(cè)表位串聯(lián)表達(dá)(命名為B102),并初步評(píng)價(jià)其作為診斷抗原的血清學(xué)診斷價(jià)值。將MtbPstS1、ESAT6、CFP10、Ag85B、Ag85A及PPE54等6個(gè)蛋白的11個(gè)B細(xì)胞預(yù)測(cè)表位串聯(lián),加入合適的連接臂后全基因合成;將多表位片段插入帶有TRX標(biāo)簽的表達(dá)質(zhì)粒中,在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達(dá),并利用Ni²⁺-Chelating親和層析和DEAE陰離子交換層析純化目的蛋白;利用Western blotting (WB)技術(shù)對(duì)目的蛋白抗原性進(jìn)行鑒定,并建立Mtb抗體檢測(cè)競(jìng)爭(zhēng)法ELISA技術(shù),初步評(píng)價(jià)此方法對(duì)陰陽(yáng)血清樣本的鑒別能力。目的蛋白以包涵體形式存在,其表達(dá)量約占菌體總蛋白的31.25%,經(jīng)純化及復(fù)性后蛋白B102可溶性存在,濃度為3.124mg/mL,純度為96.71%;WB實(shí)驗(yàn)表明目的蛋白能與Mtb陽(yáng)性血清相應(yīng)抗體發(fā)生反應(yīng)。對(duì)60份Mtb陽(yáng)性血清及60份Mtb陰性血清進(jìn)行檢測(cè)得出其靈敏度為90.00%,特異性為93.33%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為93.10%,陰性預(yù)測(cè)值...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料與試劑
    1.2 表達(dá)質(zhì)粒B102的構(gòu)建
    1.3 蛋白B102的制備
    1.4 蛋白B102的Western blotting分析
    1.5 蛋白B102診斷效能的評(píng)價(jià)
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 原核表達(dá)和層析純化可獲取高度均質(zhì)的蛋白B102
    2.2 蛋白B102可以與Mtb陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng)
    2.3 基于蛋白B102的競(jìng)爭(zhēng)法ELISA技術(shù)可以很好地鑒別Mtb陰陽(yáng)性血清標(biāo)本
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