在炎癥反應(yīng)過程中,選擇素-配體的相互作用介導了白細胞在血管內(nèi)皮表面的滾動和結(jié)合。選擇素-配體相互作用的化學反應(yīng)速率、反應(yīng)親和性和力學強度對白細胞的滾動起決定性作用。影響著這些化學、物理性質(zhì)的因素是他們的結(jié)構(gòu)和所處的載體表面環(huán)境。其中,載體表面微拓撲結(jié)構(gòu)不僅影響著選擇素-配體,還左右著其他粘附分子,進而影響著細胞的粘附、組裝乃至形成組織。 本文的內(nèi)容之一是從氨基酸水平考察選擇素配體的結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系。三種選擇素(P-、E-、和L-選擇素)都有一個共同的配體PSGL-1(P-selectin glycoprotein ligand-1)。PSGL-1與P-或L-選擇素發(fā)生粘附需要同時含有兩個必要結(jié)構(gòu):46、48和51位酪氨酸的硫酸化;57位蘇氨酸的O型糖苷,并經(jīng)過sLex(sialyl Lewis x)修飾。對以上3個位點的酪氨酸作替換構(gòu)建多種變異體,這些變異體與選擇素的相互作用有不同的逆反應(yīng)速率和力學強度。 為進一步考察以上3個位點的酪氨酸在PSGL-1和選擇素粘附中的作用,本文采用微管吸吮實驗技術(shù)測量了PSGL-1變異體與選擇素粘附的反應(yīng)速率和反應(yīng)親和性。人源PSGL-1野生型、經(jīng)46、...

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【學位級別】：碩士

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1 引言
    1.1 生物醫(yī)學背景
    1.2 選擇素-配體二維反應(yīng)動力學研究現(xiàn)狀
        1.2.1 選擇素-配體反應(yīng)的特殊性
        1.2.2 小系統(tǒng)化學反應(yīng)動力學隨機理論
        1.2.3 二維反應(yīng)動力學研究的實驗技術(shù)
        1.2.4 近期相關(guān)的研究方向
    1.3 本文研究的目的和科學假設(shè)
        1.3.1 酪氨酸替換對于PSGL-1反應(yīng)動力學的影響
        1.3.2 細胞表面微拓撲結(jié)構(gòu)和剛度的影響
    1.4 本文研究的主要內(nèi)容
        1.4.1 PSGL-1酪氨酸變異體的動力學分析
        1.4.2 為考察載體表面微拓撲結(jié)構(gòu)和剛度建立方法學
2 材料和方法
    2.1 PSGL-1表達細胞系的構(gòu)建
    2.2 選擇素和抗體
    2.3 紅細胞的蛋白包被
    2.4 蛋白的生物素化
    2.5 微珠的蛋白包被
        2.5.1 聚苯乙烯微珠
        2.5.2 Silica微珠
    2.6 選擇素-配體結(jié)合位點密度測量
        2.6.1 檢測方法
        2.6.2 密度測量方案
    2.7 紅細胞的生物素化
    2.8 玫瑰花瓣實驗檢測紅細胞生物素化
    2.9 實驗系統(tǒng)與工作模式
        2.9.1 實驗系統(tǒng)
        2.9.2 微管吸吮的工作方式
        2.9.3 改進的生物膜力探針的組建
    2.10 掃描電子顯微鏡對載體表面的觀察
    2.11 其它實驗方法
    2.12 實驗數(shù)據(jù)處理和模型預測
3 實驗結(jié)果
    3.1 紅細胞表面分子密度的檢測
    3.2 細胞表面PSGL-1密度的檢測
    3.3 微珠表面蛋白密度的檢測
    3.4 紅細胞生物素化的檢測
    3.5 微管特異性實驗結(jié)果
    3.6 PSGL-1野生型粘附概率曲線
    3.7 PSGL-1 46/48變異體粘附概率曲線
    3.8 PSGL-1 46/51變異體粘附概率曲線
    3.9 PSGL-1 48/51變異體粘附概率曲線
    3.10 PSGL-1動力學數(shù)值
        3.10.1 逆反應(yīng)速率
        3.10.2 反應(yīng)親和性
    3.11 掃描電子顯微鏡的觀察結(jié)果
    3.12 改進的生物膜力探針特異性實驗結(jié)果
4 討論
    4.1 PSGL-1 與選擇素反應(yīng)的動力學參數(shù)
    4.2 流動腔與微管吸吮技術(shù)的比較
    4.3 生物膜力探針的改進
5 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻
附: 1.作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文目錄
    2 作者在攻讀碩士學位期間參加的科研項目



本文編號：3869770