自從核酶這一具有催化活性的RNA分子被發(fā)現(xiàn)以后,國(guó)內(nèi)外研究者自然地將目光轉(zhuǎn)向另一類生物大分子—DNA,力圖尋找和證實(shí)一類具有催化功能的DNA分子。具有10-23基序的DNAzyme是一種高效且廣泛催化RNA切割反應(yīng)的單鏈DNA分子,它是體外選擇(invitro selection)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的第10輪次篩選出的第23號(hào)克隆,稱之10-23 DNAzyme。它由15個(gè)脫氧核糖核苷酸(5’GGCTAGCTACAA CGA3’)構(gòu)成催化結(jié)構(gòu)域,兩側(cè)分別有由7-8個(gè)脫氧核糖核苷酸構(gòu)成的底物識(shí)別結(jié)構(gòu)域。通過(guò)其兩側(cè)的底物識(shí)別序列與RNA底物通過(guò)Watson-Crick堿基配對(duì)而特異結(jié)合。其切割位點(diǎn)位于RNA分子上的未配對(duì)的嘌呤(R=A或G)和已配對(duì)的嘧啶(Y=U或C)之間。通過(guò)合理設(shè)計(jì)DNAzyme底物認(rèn)別部位的核苷酸序列,可對(duì)不同的靶RNA分子進(jìn)行切割。近來(lái)研究又發(fā)現(xiàn),通過(guò)對(duì)DNAzyme的底物識(shí)別序列進(jìn)行一定的化學(xué)修飾如在其識(shí)別結(jié)構(gòu)域上引入幾個(gè)LNA(locked nucleic acid)單體,可顯著增強(qiáng)其化學(xué)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和切割效率,稱之為L(zhǎng)NAzyme。 由于DNAzyme/LNAzyme...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞
中文摘要
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研究流程圖
第一部分：DNAzyme／LNAzyme切割RNA反應(yīng)動(dòng)力學(xué)實(shí)時(shí)分析體系的建立
    一、DNAzyme／LNAzyme對(duì)RNA的切割及反應(yīng)動(dòng)力學(xué)實(shí)時(shí)分析
    二、影響DNAzyme／LNAzyme切割RNA反應(yīng)動(dòng)力學(xué)的因素
第二部分：DNAzyme／LNAzyme在細(xì)胞內(nèi)阻斷丙型肝炎病毒基因的表達(dá)
    一、HCV-UTR／C126-EGFP融合蛋白真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    二、穩(wěn)定表達(dá)HCV-NTR／C126-EGFP的HepG₂細(xì)胞系的篩選與鑒定
    三、DNAzyme／LNAzyme阻斷丙型肝炎病毒基因表達(dá)的細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)
小結(jié)
文獻(xiàn)綜述：DNAzyme及LNAzyme研究進(jìn)展
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3817944