脂肪組織是人體的主要能量儲庫,甘油三酯貯存在細(xì)胞內(nèi)脂滴（lipid droplets, LDs）中,越來越多的研究表明脂滴是細(xì)胞內(nèi)代謝活躍的細(xì)胞器。本研究旨在探討forskolin長時間刺激脂肪分解過程中脂滴形態(tài)和脂滴表面perilipin家族蛋白的改變。以Sprague-Dawley （SD）大鼠附睪脂肪墊來源的分化脂肪細(xì)胞為研究對象,給予1μmol/L forskolin慢性刺激24 h,采用比色方法測定培養(yǎng)基中甘油的濃度;采用尼羅紅染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴形態(tài)的變化;采用熒光定量PCR檢測perilipin家族蛋白mRNA水平的改變;采用免疫印跡和免疫熒光染色觀察蛋白水平以及蛋白的亞細(xì)胞定位。結(jié)果表明,1μmol/L forskolin孵育24 h可以持續(xù)刺激脂肪分解。伴隨著脂肪分解的進(jìn)行,細(xì)胞內(nèi)脂滴形態(tài)逐漸發(fā)生改變,細(xì)胞內(nèi)聚集存在的大脂滴逐漸減少,位于細(xì)胞周邊的小脂滴逐漸增加,最終細(xì)胞內(nèi)大脂滴全部消失,取而代之的是在細(xì)胞質(zhì)中彌散存在的微小脂滴。在脂肪分解過程中,perilipin家族蛋白水平也發(fā)生明顯變化。分化成熟的脂肪細(xì)胞幾乎沒有Plin2蛋白表達(dá),而forskolin慢性刺激可以... 

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【文章目錄】：
1 MATERIALS AND METHODS
    1.1 Cell culture and treatment
    1.2 Immunoblotting
    1.3 Immunofluorescence staining
    1.4 Evaluation of lipolysis by glycerol assay
    1.5 Quantitative real-time PCR
    1.6 LDs staining with Nile red
    1.7 Statistics analysis
2 RESULTS
    2.1 Forskolin induced sustained lipolysis in differ-entiated adipocytes
    2.2 Morphological changes of LDs during sustained stimulation of forskolin
    2.3 The mRNA levels of Plin family proteins weredifferentially regulated during sustained stimulation of forskolin
    2.4 Forskolin increased the protein level of Plin2 in a time-dependent manner
    2.5 Plin2 co-localized with Plin1 on LDs in forskolin-treated adipocytes
3 DIScUSSION


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腫瘤壞死因子-α上調(diào)大鼠分化脂肪細(xì)胞脂肪分化相關(guān)蛋白水平及其機(jī)制[J]. 劉梅芳,俎魯霞,徐沖,蒲申申,徐國恒.  北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2008(06)



本文編號：3654068