本文關(guān)鍵詞：腦心通對(duì)大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞模型治療機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的:1.磁共振彌散加權(quán)成像(DWI)和灌注加權(quán)成像(PWI)聯(lián)合應(yīng)用,動(dòng)態(tài)觀察大鼠腦梗死區(qū)的組織灌注及腦梗死體積變化情況。側(cè)面評(píng)價(jià)腦心通治療腦梗死的療效。2.采用longa Zea線栓法進(jìn)行大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)模型的制備,給予腦心通治療后,測(cè)定腦組織中TNF-α、MMP-9、NF-κB m RNA水平和TNF-α、MMP-9、NF-κB蛋白表達(dá)水平,探討腦心通對(duì)腦梗死的治療作用的機(jī)制。3.大鼠MCAO后,測(cè)定腦組織中AQP-4 m RNA水平和蛋白表達(dá)水平,測(cè)定缺血腦組織干濕重百分比,探討腦心通對(duì)腦缺血大鼠模型腦水腫和AQP-4表達(dá)水平的影響。研究方法:1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥:所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程均符合《實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物使用與愛護(hù)指南》規(guī)定。健康SD雄性大鼠,體重200~220g之間,在人工控制溫度與晝夜節(jié)律的環(huán)境中飼養(yǎng),大鼠自由飲水與飲食。所有大鼠隨機(jī)分為(11)假手術(shù)組:只做頸部手術(shù),不插入線栓;(12)模型對(duì)照組:結(jié)扎血管后予以生理鹽水給藥;(13)腦心通治療組:結(jié)扎血管后給予腦心通于缺血后30min給藥。每組大鼠分別按12h、1d、3d、5d、7d處死時(shí)間點(diǎn)分為5個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只大鼠。給藥途徑:將腦心通膠囊內(nèi)的藥物粉末用蒸餾水溶解,稀釋成0.05g/ml濃度備用。腦心通組大鼠于術(shù)后給予步長腦心通溶液(0.45g/kg·d)灌胃(依據(jù)前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ));假手術(shù)組和模型對(duì)照組大鼠給予和腦心通組相等容積的生理鹽水灌胃。2.動(dòng)物模型制備:采用Zea Longa線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型,大鼠清醒后采用Bederson5分評(píng)分法判斷大鼠是否造模成功,評(píng)分≥2分即為造模成功。假手術(shù)組大鼠僅結(jié)扎頸部血管而不需插入線栓。3.MRI檢查方法:分別于0.5d、1 d、3 d、5 d、7 d掃描磁共振,采用3.0T超導(dǎo)磁共振成像系統(tǒng),大鼠專用線圈,大鼠經(jīng)水合氯醛(0.35g/kg)麻醉后,采用俯臥位,行頭顱冠狀位掃描,層厚2 mm,層間距0 mm,層數(shù)11,觀察腦梗死區(qū)域變化情況。4.腦組織中AQP-4、TNF-α、MMP-9和NF-κB m RNA的檢測(cè):取出腦組織后,用預(yù)冷的生理鹽水沖洗后去除小腦和枕葉。取梗塞病灶周圍腦組織約100mg,放入玻璃勻漿器中,加入Trizol,提取總RNA,在M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶作用下合成c DNA,再以c DNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR,檢測(cè)其相對(duì)表達(dá)量。5.Western Blot法檢測(cè)腦梗死灶周圍腦組織中目的蛋白的表達(dá)水平:使用預(yù)冷的裂解液對(duì)各組大鼠腦組織進(jìn)行裂解,按蛋白提取試劑盒說明書操作提取蛋白,測(cè)定蛋白濃度后,經(jīng)SDS-PAG(10%分離膠、5%濃縮膠)凝膠電泳將蛋白分離開,再經(jīng)過轉(zhuǎn)膜電泳后蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。帶有蛋白的PVDF膜用5%脫脂奶粉封閉,加入配制好的一抗在37℃孵育2~4h或者4℃過夜;用TBST溶液洗膜3次后,加入配制好的二抗在37℃孵育1h。TBST洗膜3次后用化學(xué)發(fā)光液滴滿膜上,在凝膠成像系統(tǒng)經(jīng)暗室曝光,并拍照保存。用圖像分析系統(tǒng)對(duì)電泳條帶進(jìn)行分析,將各條帶灰度值與β-actin條帶灰度值的比值作為蛋白表達(dá)的相對(duì)值。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS 16.0系統(tǒng)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,所有計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示。兩樣本均數(shù)比較采用Student-t檢驗(yàn)(雙尾),多組劑量資料采用單因素方差分析(One-Way Analysis of Variance,One-Way ANOVO),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果:1.磁共振檢查結(jié)果:隨著治療時(shí)間延長,模型組腦梗死體積變化不明顯;腦心通治療組腦梗死體積較模型對(duì)照組減小,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.腦梗死大鼠腦組織的TNF-α、MMP-9和NF-κB m RNA的表達(dá)水平:與假手術(shù)組相比較,模型對(duì)照組TNF-α、MMP-9和NF-κB m RNA表達(dá)水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型對(duì)照組相比較,腦心通治療組大鼠腦組織TNF-α、MMP-9和NF-κB m RNA表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.腦梗死大鼠腦組織的TNF-α、MMP-9和NF-κB蛋白表達(dá)水平:與假手術(shù)組相比較,模型對(duì)照組TNF-α、MMP-9和NF-κB蛋白表達(dá)水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型對(duì)照組相比較,腦心通治療組大鼠腦組織TNF-α、MMP-9和NF-κB蛋白表達(dá)水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.腦梗死模型大鼠腦水腫情況:與假手術(shù)組相比較,模型對(duì)照組大鼠腦組織AQP-4表達(dá)量增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型對(duì)照組相比較,腦心通治療組大鼠腦組織AQP-4表達(dá)量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。腦組織含水量測(cè)定,腦心通治療組較模型對(duì)照組腦組織含水量減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.腦心通對(duì)大鼠腦梗死有具有治療作用,腦梗死體積較模型對(duì)照組減少。2.腦心通可以降低MCAO大鼠腦組織的AQP4、TNF-α、MMP-9和NF-κBm RNA水平,以及降低腦梗死組織周圍TNF-α、MMP-9和NF-κB的蛋白表達(dá)量,減輕缺血后腦組織的炎癥反應(yīng),保護(hù)腦組織。3.腦心通可以改善大鼠缺血后的神經(jīng)功能缺損程度,減輕腦水腫程度以防止進(jìn)一步腦損傷。
【關(guān)鍵詞】：腦心通 缺血性腦血管病 炎癥 磁共振檢查 腦水腫
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R277.7;R-332
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 縮略詞表12-13
• 第一章 緒論13-17
• 1.1 研究背景13-14
• 1.2 研究目的14-15
• 1.3 研究方法15
• 1.4 實(shí)驗(yàn)思路15
• 1.5 預(yù)期結(jié)果15-16
• 1.6 研究意義16-17
• 第二章 大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型制作17-20
• 2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料17
• 2.3 手術(shù)制作模型方法17-18
• 2.4 模型成功與否評(píng)價(jià)18
• 2.5 結(jié)果與造模體會(huì)18-20
• 第三章 腦心通治療腦梗死的機(jī)制研究20-37
• 3.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象20
• 3.2 實(shí)驗(yàn)所用藥物20
• 3.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備20-22
• 3.4 實(shí)驗(yàn)方法22-32
• 3.5 結(jié)果32-34
• 3.6 討論34-37
• 第四章 腦心通對(duì)腦缺血大鼠腦組織AQP-4 和腦水腫的影響37-42
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料37
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法37-39
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-40
• 4.4 討論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-47
• 第五章 綜述47-62
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章和參加課題情況62-63
• 致謝63

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