中東呼吸綜合征冠狀病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）的刺突蛋白（Spike,S）亞單位1（S1）是引起宿主免疫反應(yīng)和產(chǎn)生中和抗體的主要靶抗原,也是疫苗研發(fā)和病原檢測的重要靶標,選用適宜的真核表達系統(tǒng)高效表達S1蛋白是進行相關(guān)研究的基礎(chǔ)。為確定MERS-CoV S1在哺乳動物細胞中高效分泌性表達的信號肽序列,構(gòu)建了含高斯熒光素酶（Gaussia luciferase,GLuc）、人組織纖溶酶原激活劑（Tissue plasminogen activator,tPA）及小鼠免疫球蛋白G的2a亞型（Mouse immunoglobular G subtype 2a,MIgG2a）7個信號肽（原始序列和改造序列）序列的MERS-CoV S1表達質(zhì)粒,瞬時轉(zhuǎn)染細胞后,通過Western Blot檢測并比較細胞培養(yǎng)上清和裂解液中S1的表達水平及分泌表達效率（條帶密度灰度掃描比）,并對哺乳動物細胞表達的S1蛋白的純度與抗原特性進行了分析。結(jié)果表明7種信號肽在293T、BHK21和ExpiCHO-S^TM

【文章來源】：病毒學(xué)報. 2019,35(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

pLQ-uni-51表達質(zhì)粒示意圖和信號肚序列

pressionefficiencyofMERS‐CoVS1inExpiCHO‐STMwithGLuc‐2，tPA‐1，tPA‐2SPsNotes：A.TheexpressionofMERS‐CoVS1inculturesupernatant（S）andcelllysate（L）ofExpiCHO‐STMdetectedbyWesternBlot；B.TherelativeexpressionlevelofMERS‐CoVS1insupernatant（S/β‐actin）ofExpiCHO‐STM；C.Thesecretoryexpressionefficiency（S/L）ofMERS‐CoVS1inExpiCHO‐STM.1：Vectorcontrol；2：GLuc‐2；3：tPA‐1；4：tPA‐2圖5ExpiCHOSTM中大量表達MERSCoVS1經(jīng)純化后的純度和抗原性分析注：A：a：SDS‐PAGE；b：WesternBlot分析MERS‐CoVS1抗原特異性；B：ELISA分析MERS‐CoVS1抗原特異性Figure5AnalysisofpurityandantigenicityofpurifiedMERS‐CoVS1fromExpiCHO‐STMNotes：A.a：SDS‐PAGE；b：AntigenicityanalysisofMERS‐CoVS1byWesternBlot；B：AntigenicityanalysisofMERS‐CoVS1byELISA··24


本文編號：3605737