目的:構建穩(wěn)定表達人白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）及人抑瘤素M（oncostatin M,OSM）基因的人胚胎成纖維細胞,將其作為飼養(yǎng)層細胞,研究其對臍帶血CD34⁺造血干/祖細胞（hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC）體外擴增的支持作用。方法:將本科室構建和保存的人LIF和OSM基因真核表達載體pcDNA3.0-hLIF和pcDNA3.1（-）-hOSM經(jīng)鑒定后采用脂質體轉染法分別轉入WI-38人胚肺成纖維細胞系中進行表達,通過氨基糖苷類抗生素類似物G418篩選出能夠穩(wěn)定表達目的基因hLIF和hOSM的單細胞克隆。同時嘗試構建這兩個基因的重組逆轉錄病毒載體,用逆轉錄病毒載體介導基因的轉移,經(jīng)zeocin篩選后獲得基因修飾的人胚胎成纖維細胞株。采用分子生物學（RT-PCR法）和免疫學（ELISA法）的方法分別從mRNA水平和蛋白質水平檢測目的基因能否在人胚胎成纖維細胞中成功轉錄和翻譯,同時檢測真核細胞表達上清中的細胞因子hLIF及hOSM對靶細胞的生物學活性。然后將構建成功... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

質粒抽提后電泳圖

2 hLIF、hOSM 基因在 WI-38 細胞中轉錄的鑒定將實驗組 WI38-pcDNA3.0-hLIF、WI38-pcDNA3.1(-)-hOSM 和空載體對照I-38 細胞總 RNA 進行 RT-PCR，其產(chǎn)物經(jīng) 1.0%瓊脂糖凝膠電泳后，兩實驗組出特異性亮帶，而空載體對照組則沒有相應的條帶（如圖 1-3）。上述結果表明 hLSM 基因分別成功地被轉入 WI-38 細胞內(nèi)，并能在 WI-38 細胞中進行轉錄。圖 1-3 轉染 WI-38 細胞的 RT-PCR 鑒定

hOSM 基因在 WI-38 細胞中轉錄的鑒定組 WI38-pcDNA3.0-hLIF、WI38-pcDNA3.1(-)-hOSM 和空載 RNA 進行 RT-PCR，其產(chǎn)物經(jīng) 1.0%瓊脂糖凝膠電泳后，兩實，而空載體對照組則沒有相應的條帶（如圖 1-3）。上述結果表別成功地被轉入 WI-38 細胞內(nèi)，并能在 WI-38 細胞中進行轉錄

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]抑瘤素M對照射后小鼠造血系統(tǒng)的影響[J]. 聶晶,范永星,趙洪禮.  沈陽部隊醫(yī)藥. 2004(04)
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本文編號：3588558