研究目的：人微小病毒B19（Human Parvovirus B19）系微小病毒屬中唯一能致人類疾病的一種病原體，可引起傳染性紅斑、再障危象等多種人類疾病。目前尚來(lái)建立針對(duì)該病毒的特異性疫苗，對(duì)人微小病毒B19感染的預(yù)防和治療是急待解決的問(wèn)題。近年來(lái)國(guó)外開(kāi)始把B19的衣殼蛋白作為疫苗抗原進(jìn)行研究。本課題的目的是利用真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1為載體，將選擇出的B19-VP2抗原表位豐富區(qū)基因片段重組其中，構(gòu)建出pcDNA3.1-VP2重組表達(dá)載體，并將重組質(zhì)粒免疫動(dòng)物，觀察其免疫效應(yīng)，以探討人微小病毒B19-VP2基因作為基因疫苗的可行性，為最終建立針對(duì)該病毒的特異性實(shí)用疫苗奠定基礎(chǔ)。 方法：從人微小病毒B19的基因序列和結(jié)構(gòu)分析中可獲得B19-VP2的氨基酸序列，利用ANTHEWIN和DNASIS軟件對(duì)B19-VP2的表位進(jìn)行分析；在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)出B19-VP2靶區(qū)域引物，為了克隆方便和插入方向正確，特意在兩條引物上分別加入HindⅢ和BamHⅠ內(nèi)切酶位點(diǎn)；利用PCR技術(shù)從含B19病毒DNA序列的質(zhì)粒中擴(kuò)增出VP2基因；將其連接在pGEM-T質(zhì)粒上，轉(zhuǎn)化JM109，運(yùn)用pGEM... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：45 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 基因疫苗的研究現(xiàn)狀
    1.2 人微小病毒B19的致病性及生物學(xué)性狀
    1.3 研究的目的、內(nèi)容和意義
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 材料
    2.2 主要儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)中配制的主要試劑
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 目的基因(B19-VP2)的克隆
    3.2 目的基因(B19-VP2)的亞克隆
    3.3 基因疫苗pcDNA3.1-VP2的大量制備和免疫活性測(cè)定
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 表位分析結(jié)果
    4.2 靶基因擴(kuò)增結(jié)果
    4.3 靶基因酶切鑒定結(jié)果
    4.4 克隆和亞克隆重組子鑒定結(jié)果
    4.5 pGEM-T-VP2和pcDNA3.1-VP2的序列分析結(jié)果
    4.6 ELISA結(jié)果
5 討論
    5.1 B19-VP2蛋白的表位
    5.2 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    5.3 真核表達(dá)載體的表達(dá)
    5.4 構(gòu)建pcDNA3.1-B19-VP2真核表達(dá)載體的意義
6 結(jié)論
    6.1 B19-VP2主要抗原表位的分析
    6.2 目的基因的克隆
    6.3 目的基因的亞克隆
    6.4 基因疫苗的免疫效應(yīng)
參考文獻(xiàn)
綜述
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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