結核桿菌是結核病的病原菌。結核桿菌侵入機體進行繁殖，釋放大量抗原尤其是蛋白抗原，選擇性刺激B細胞叢產(chǎn)生大量免疫球蛋白，急性早期階段以IgA、 IgM升高為主，此后IgG水平逐漸升高，升高的程度與病情輕重相關[1]。因此，檢測體液中的抗結核抗體對結核病的診斷有重要的輔助作用。引起免疫反應的結核抗原多而復雜，為了尋找敏感性高特異性強的結核抗原，本實驗利用基因工程技術重組結核分枝桿菌蛋白抗原，從結核分枝桿菌中提取菌體蛋白和脂多糖抗原，并對這些抗原進行抗原性分析。首先，從結核分枝桿菌標準株H37Rv中提取DNA作為模板，根據(jù)GenBank提供的蛋白基因序列設計引物，通過PCR法克隆38KDa和14KDa蛋白基因，利用表達載體PET-30a（＋）和PET-22b（＋）分別以包涵體和可溶性蛋白的形式表達該蛋白，再利用離子親和層析方法對蛋白進行純化，獲得高純度的目的蛋白，經(jīng)Western Blot檢測表明兩種重組蛋白都具有良好的抗原性。其次，為了獲得結核桿菌菌體蛋白和脂多糖抗原，利用改良的液體蘇通培養(yǎng)基培養(yǎng)大量的結核分枝桿菌，收集菌體，冰浴超聲破<WP=7>碎，用酚/氯仿抽提提取菌體蛋白... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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前言
第一部分 結核分枝桿菌特異性蛋白抗原的基因克隆、表達及純化
第二部分 結核分枝桿菌脂多糖和菌體蛋白的制備
第三部分 結核分枝桿菌特異性抗原的抗原性分析
全文總結
參考文獻
綜述
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]結核分支桿菌重組38000蛋白的免疫原性特征[J]. 何秀云,莊玉輝,張曉剛,熊志紅,董蒽軍,史迎昌,昌增益.  中華結核和呼吸雜志. 2000(08)



本文編號：3547412