丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）引起的傳染性疾病，是慢性肝病的主要原因之一。全球范圍內(nèi)HCV感染人數(shù)達(dá)1.7億，我國(guó)約4000多萬(wàn)人，HCV感染已成為嚴(yán)重的世界公共衛(wèi)生問題之一。迄今尚無(wú)疫苗和特異有效的治療藥物。 鑒于蛋白酶和逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑在治療HIV方面取得良好療效，以蛋白酶和RNA聚合酶為靶標(biāo)尋找特異有效的治療藥物已成為HCV感染防治研究的重要方向之一。缺乏可靠的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)和小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ�，極大地阻礙了抗HCV藥物的篩選，因此以酶分子為靶位的測(cè)定系統(tǒng)常作為藥物篩選的替代系統(tǒng)。由于候選藥物分子必須具有易進(jìn)入細(xì)胞、穩(wěn)定性好等特征，建立一種細(xì)胞水平上酶活性的測(cè)定系統(tǒng)對(duì)于篩選抗HCV藥物無(wú)疑有著重要意義。 NS3／4A絲氨酸蛋白酶在多聚蛋白前體加工成熟中起著關(guān)鍵的作用，是抗HCV的主要靶標(biāo)。鑒于NS3／4A絲氨酸蛋白酶晶體結(jié)構(gòu)、生化特性和切割水解底物的特征，以及細(xì)胞凋亡酶3（caspase-3，簡(jiǎn)寫為Casp3）的結(jié)構(gòu)特征和活化方式已經(jīng)明確。本研究依據(jù)Casp3是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中重要的凋亡執(zhí)行分子之一，它的活化必然會(huì)引起細(xì)胞的凋亡。將 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

單鏈Ns3一N4sAZI_3;蛋白酶的結(jié)構(gòu)及識(shí)別底物序列160】Fig.1ThestruetureofscNS3喇S4A.(a)RibbondiagramofseNS3一S4A，anengineeredmoleculethatconsistsof631NS3residues，14NS4Aresiduesknownto

名為Caspase，稱之為細(xì)胞凋亡酶;③活性形式都是由兩大、兩成的異源四聚體。自從第一個(gè)Caspase分子(Caspase一)l被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，在哺乳動(dòng)現(xiàn)了14種同源分子，在果蠅中發(fā)現(xiàn)了5種同源分子。哺乳動(dòng)物C為兩類:CIE亞族和CED一3家族，前者參與炎癥反應(yīng)，如Caspase一11、12、13、14等，后者參與細(xì)胞凋亡。CED一3家族又分為兩為起始分子(initiator)，如Caspase一2、8、9、10，它們接到凋發(fā)生自我剪接而激活，引起下游Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng);另一類為執(zhí)(executioner)，如easpase一3、6、7，它們可直接降解胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)能蛋白，引起凋亡。凋亡執(zhí)行分子的激活是細(xì)胞凋亡的最后環(huán)Caspase一3起著重要作用(圖2)〔’04]。

p810Cp一3激活。:細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)或凋亡信號(hào)能引起線粒體導(dǎo)因子，細(xì)胞色素c能與APa-fl、CasPaes一9前體、后召集并激活casP3I’，04‘。，]。這種內(nèi)源性途徑可其它因子(如CZa十)等調(diào)控。徑既可以獨(dú)立發(fā)揮作用，又可相互交叉，啟動(dòng)后CasP3被上游Caspase分子以反式作用方來(lái)描述CasP3被反式作用活化。顆粒酶B首先連接區(qū)的特定位點(diǎn)，形成一個(gè)具有部分活性間產(chǎn)物自我水解切割原區(qū)，生成具有完全活原區(qū)也可以被其他凋亡酶以反式作用切割。3所示[，0，]。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MTT比色分析法檢測(cè)卵巢癌藥物敏感性[J]. 呂慶杰,馬穎,宋繼謁,董芳,宓貞.  中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(06)
[2]MTT法在抗病毒藥物篩選中的應(yīng)用[J]. 劉釗,楊占秋,肖紅,文莉,李汝霖,姜旋.  武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2004(03)
[3]丙型肝炎防治指南[J].   中華醫(yī)學(xué)雜志. 2004(09)

碩士論文
[1]HCV NS3蛋白的表達(dá)、純化、單克隆抗體制備及其結(jié)合區(qū)域的分析[D]. 楊敬.第四軍醫(yī)大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3529163