魚類及兩棲類動物的視網膜睫狀緣區(qū)（CMZ）存在視網膜干細胞，在視網膜損傷時，視網膜內有增殖潛能的細胞可快速增殖、分化以修復更新受損細胞。近年來，隨著神經干細胞研究的不斷深入，國外部分學者開始嘗試哺乳動物視網膜干細胞的分離探索工作。研究資料顯示，這些在進化上較高級的動物也存在著一個與魚類及兩棲類的CMZ區(qū)（睫狀緣區(qū)）相似的區(qū)域，國內在視網膜干細胞的研究方面尚未見文獻報道。目的：研究視網膜干細胞的分離、體外培養(yǎng)方法與增殖、分化規(guī)律，以期為視網膜疾病的研究提供基礎性資料。方法：（1）應用細胞培養(yǎng)技術，在不同有絲分裂原（bFGF、EGF、胰島素）作用下，比較胎齡17天昆明小鼠眼的睫狀體部（CMZ）、視網膜色素部（RPE）、視網膜神經部（NR）以及虹膜部體外培養(yǎng)細胞的特點，確定視網膜干細胞的存在部位；（2）通過免疫細胞化學及免疫熒光方法研究視網膜干細胞的增殖及分化特性；（3）體外應用VEGF定向誘導視網膜干細胞向感光細胞分化。結果：（1）來自CMZ區(qū)的培養(yǎng)細胞，在特定外源性有絲分裂原作用下，可形成懸浮生長的細胞團，經多次傳代，細胞增殖能力未見衰減。BrdU標記結果顯示增殖的大部分細胞為BrdU陽... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學位級別】：碩士

【圖文】：

培養(yǎng)細胞的形態(tài)觀察^，分裂中的堪養(yǎng)細胞哎x20》8E培養(yǎng)中的瓜浮細胞Sx峋C}第8代的培界繃腳團你1劫

血清誘導分化后GFAp免疫反應陽性細胞}c法)

6. VEGF 的定向誘導作用6.1 培養(yǎng)細胞的觀察6.1.1 VEGF 組 培養(yǎng) 12h 細胞貼壁，部分細胞有突起伸出。7d 后，多數(shù)細胞貼壁生長，分布均勻，折光性好，形態(tài)多樣，大部分細胞突起較短�？梢娚倭繎腋〖毎麍F，折光性較差，多為已凋亡的細胞。瓶底有較多死亡細胞及細胞碎片。6.1.2 非 VEGF 組 培養(yǎng) 2h 可見部分細胞貼壁。7d 后，細胞貼壁生長良好，分布較均勻。6.2 熒光顯微鏡下觀察6.2.1 實驗組 VEGF 作用組鏡下可見散落的呈明顯紅色熒光的抗 Opsin 陽性細胞，陽性細胞胞體明顯，突起不明顯(圖 9 A)。非 VEGF 組陽性細胞數(shù)量較少(圖 9 B)，多數(shù)視野細胞數(shù)為 0。6.2.2 空白對照組 未見陽性細胞。6.3 VEGF 組與非 VEGF 組誘導生成感光細胞的比較 見圖 9、表 2。


本文編號：3525682