目的建立OmpA過表達慢病毒載體并觀察其對RAW264.7細胞NLRP3炎癥小體的激活。方法以鮑曼不動桿菌ATCC 19606為模板,設計引物擴增OmpA基因,將其克隆至慢病毒表達載體pCDH-MSCV-copGFP中。將此表達質粒和輔助質粒共轉染HEK293T細胞包裝病毒,濃縮病毒上清液并用GFP報告基因法測定病毒滴度;用包裝病毒顆粒感染RAW264.7細胞48h,Real-time PCR法檢測OmpA的mRNA表達水平,用Western blot法檢測OmpA蛋白以及感染后NLRP3炎癥小體相關蛋白。結果成功構建OmpA過表達慢病毒載體并在HEK293T細胞中包裝得到病毒,經(jīng)測定病毒滴毒為1.5×109 TU/mL;重組OmpA病毒感染RAW264.7細胞表達OmpA蛋白,該蛋白能引起NLRP3炎癥小體激活。結論成功構建OmpA過表達慢病毒載體并證明OmpA可激活RAW264.7細胞NLRP3炎癥小體。 

【文章來源】：中國病原生物學雜志. 2019,14(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

圖２慢病毒包裝ＨＥＫ２９３Ｔ細胞熒光檢測Ｆｉｇ．２ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＨＥＫ２９３Ｔｃｅｌｌｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]芩百清肺濃縮丸對肺炎支原體感染BALB/c小鼠NLRP3炎性體的影響[J]. 張涵,索緒斌,張云凌,姚琳,許慶瑞,張樹明,王偉明.  中國病原生物學雜志. 2017(10)



本文編號：3491407