目的:骨髓組織中除了造血干細(xì)胞外,還存在一種非造血組織干細(xì)胞-骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）。MSCs具有分裂、增殖、分化成多種細(xì)胞的潛能,在一定的體內(nèi)或體外誘導(dǎo)條件下,可以分化為脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞等。但成人骨髓中MSCs含量極低,為得到足夠數(shù)量MSCs應(yīng)用于臨床,需要體外培養(yǎng)、擴(kuò)增和純化。同時(shí)干細(xì)胞在長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中,可能會(huì)出現(xiàn)微生物污染或基因型改變等情況,為獲得來(lái)源方便的間充質(zhì)干細(xì)胞,開展有效的干細(xì)胞移植及建立干細(xì)胞庫(kù),需長(zhǎng)期低溫保存間充質(zhì)干細(xì)胞。本研究目的在于建立穩(wěn)定的MSCs體外培養(yǎng)和擴(kuò)增體系以及凍存最佳方案。方法:取正常成人骨髓用含10%胎牛血清的LG-DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)、擴(kuò)增,將體外擴(kuò)增培養(yǎng)P1細(xì)胞用含5%DMSO-30%FBS-DMEM凍存保護(hù)液重懸,細(xì)胞終濃度為1×106/ml,細(xì)胞分別用二步法和程控凍存方法凍存。低溫凍存3個(gè)月后40℃水浴快速?gòu)?fù)蘇細(xì)胞、培養(yǎng),探討低溫凍存對(duì)MSCs生物學(xué)特性的影響,比較二步法凍存和程控凍存方法的凍存效果。對(duì)凍存后細(xì)胞進(jìn)行成骨、成脂肪和神經(jīng)元細(xì)胞誘導(dǎo),進(jìn)一步證明... 

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