目的建立血管衰老模型,觀察比較高葡萄糖（HG）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、過(guò)氧化氫（H₂O₂）及棕櫚酸（PA）對(duì)原代大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（RAEC）誘導(dǎo)衰老作用。方法取2月齡雄性Wistar大鼠,組織貼塊法提取原代RAEC并采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)CD31的表達(dá)并進(jìn)行鑒定。分別應(yīng)用30 mmol/L葡萄糖（HG）、 10μmol/L AngⅡ、 100μmol/L H₂O₂、 0.5 mmol/L PA處理原代RAEC 24 h。采用β-半乳糖苷酶染色觀察細(xì)胞衰老情況,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)衰老相關(guān)基因P16 mRNA的水平, Western blot法檢測(cè)衰老相關(guān)基因P16、 P21、 P53蛋白水平;免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色觀察P16的表達(dá), CCK-8法觀察細(xì)胞存活率。結(jié)果與對(duì)照組相比,各處理組RAEC中β-半乳糖苷酶染色細(xì)胞增加,以H₂O₂、 PA處理組更明顯; HG、 AngⅡ、 H₂O₂、 PA處理均可... 

【文章來(lái)源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019,35(03)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

分析．1:對(duì)照組;2:HG處理組;3:AngⅡ處理組;4:H2O2處理組;5:PA處理組．bP＜0．01vs1．圖2ＲAEC的衰老相關(guān)SA-β-gal染色結(jié)果A:ＲAEC的SA-β-gal活性(SA-β-gal染色

A:實(shí)時(shí)定量PCＲ檢測(cè)ＲAEC的P16mＲNA水平;B:Westernblot法檢測(cè)ＲAEC的P16、P21、P53蛋白水平;C:ＲAEC的P16、P21、P53蛋白水平的半定量分析．1:對(duì)照組;2:HG處理組;3:AngⅡ處理組;4:H2O2處理組;5:PA處理組．a(chǎn)P＜0．05，bP＜0．01vs1．圖3ＲAEC的P16、P21、P53水平A:對(duì)照組;B:HG處理組;C:AngⅡ處理組;D:H2O2處理組;E:PA處理組．圖4ＲAEC的P16表達(dá)(免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色，×400)2．5H2O2和PA處理降低ＲAEC存活率CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HG處理組與AngⅡ處理組細(xì)胞存活率與對(duì)照組相當(dāng)，而H2O2處理組與PA處理組細(xì)胞存活率顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01，圖5)。1:對(duì)照組;2:HG處理組;3:AngⅡ處理組;4:H2O2處理組;5:PA處理組．bP＜0．01vs1．圖5ＲAEC細(xì)胞存活率3討論血管老化是促進(jìn)心血管疾病發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素，而內(nèi)皮細(xì)胞衰老是血管整體老化的重要病理生理改變之一［17］。欲深入研究血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老及抗衰老的相關(guān)機(jī)制，首先要成功構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老模型，本研究提取純化ＲAEC，觀察HG、AngⅡ、H2O2、高脂對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)衰老的作用。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor，CKI)是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的重要信號(hào)分子，其中最具代表性的是P16、P21和P53。CKI主要通過(guò)與細(xì)胞周期蛋白(cyclin)競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)，減少cyclin/CDK復(fù)?

G處理組;C:AngⅡ處理組;D:H2O2處理組;E:PA處理組．圖4ＲAEC的P16表達(dá)(免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色，×400)2．5H2O2和PA處理降低ＲAEC存活率CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HG處理組與AngⅡ處理組細(xì)胞存活率與對(duì)照組相當(dāng)，而H2O2處理組與PA處理組細(xì)胞存活率顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01，圖5)。1:對(duì)照組;2:HG處理組;3:AngⅡ處理組;4:H2O2處理組;5:PA處理組．bP＜0．01vs1．圖5ＲAEC細(xì)胞存活率3討論血管老化是促進(jìn)心血管疾病發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素，而內(nèi)皮細(xì)胞衰老是血管整體老化的重要病理生理改變之一［17］。欲深入研究血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老及抗衰老的相關(guān)機(jī)制，首先要成功構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞衰老模型，本研究提取純化ＲAEC，觀察HG、AngⅡ、H2O2、高脂對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)衰老的作用。細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor，CKI)是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的重要信號(hào)分子，其中最具代表性的是P16、P21和P53。CKI主要通過(guò)與細(xì)胞周期蛋白(cyclin)競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(cyclin-dependentkinase，CDK)，減少cyclin/CDK復(fù)合物形成，阻止DNA合成基因的轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯，促使細(xì)胞衰老。既往研究證實(shí)，P16、P21和P53的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為標(biāo)志物在衰老細(xì)胞中普遍增加［18－19］。因此，本研究采用上述指標(biāo)作為內(nèi)皮細(xì)胞衰老的功能標(biāo)志物，評(píng)價(jià)細(xì)胞衰老程度。葡萄糖是一種人體必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，正常情況下參與機(jī)體的各項(xiàng)生理過(guò)程，但過(guò)量的葡萄糖在誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷、

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]D-半乳糖刺激小鼠睪丸TM4支持細(xì)胞分泌功能的衰退及其機(jī)制[J]. 陳茜,趙海霞,馬娜,尤旭,楊思琪,馬瓊艷,袁丁,張長(zhǎng)城.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2018(04)
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[3]137Cs γ-射線誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞衰老模型的建立[J]. 路璐,黃頌,李德冠,張俊伶,邢永華,李程程,孟愛(ài)民.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2014(01)



本文編號(hào)：3479807