甲狀旁腺激素（PTH）是保持體內(nèi)血鈣及磷酸鹽平衡的主要調(diào)節(jié)因子，甲狀旁腺（PTG）損傷，腫瘤或遺傳因素等都會導(dǎo)致PTH分泌不足或生物活性降低，造成低鈣血癥即甲狀旁腺機能減退癥（HPT）。目前，國內(nèi)外所采取的各種治療方法，效果都不甚理想。近年來，隨著分子生物學(xué)及相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)的迅速發(fā)展，相關(guān)基因克隆及表達的成功使得對該病的基因治療成為可能。本研究的目的是擴增出PTH的完整編碼序列，構(gòu)建該基因的表達載體質(zhì)粒。根據(jù)國外已報道的甲狀旁腺激素（PTH）基因序列，應(yīng)用OLIG04.0設(shè)計引物，并在引物中引入兩個酶切位點（EcoRI、XbaI）。以從人胚甲狀旁腺組織中提取的mRNA作為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）擴增出一條大小約270bp的cDNA片段，將該基因片段經(jīng)EcoRI、XbaI兩個限制性內(nèi)切酶消化后，插入到pCR3.1載體上，經(jīng)大腸桿菌JM109感受態(tài)轉(zhuǎn)化后，篩選獲得含插入片段的重組表達質(zhì)粒（pCR3.1·PTH）。對陽性重組質(zhì)粒進行鑒定及序列分析。結(jié)果表明陽性重組質(zhì)粒經(jīng)PCR擴增，可以獲得與PTH基因大小相符的片段，約270bp；另外，經(jīng)EcoRI、XbaI雙酶切鑒定，也可... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：34 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 甲狀旁腺激素（PTH）分子生物學(xué)研究進展
    1.2 甲狀旁腺機能減退癥
    1.3 PTH用于甲狀旁腺機能減退癥治療的展望
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
    2.2 試驗方法
3 結(jié)果
    3.1 目的基因的RT-PCR結(jié)果
    3.2 重組質(zhì)粒的限制性酶切分析
    3.3 DNA的序列測定與分析
4 討論
5 結(jié)論
6 參考文獻
附圖
致謝



本文編號：3370104